Identification of chemicals that enhance expression of myoblast growth factor Dp71ab

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デュシェンヌ型筋ジストロフィー（D M D）は、進行性の筋萎縮症で筋芽細胞の枯渇による筋細胞の減少を特徴とする。筋芽細胞の増殖法の確立はD M Dの有力な治療法である。申請者は、ジストロフィンDp71の２エクソン欠失型アイソフォームであるDp71abが筋芽細胞の増殖因子であることを世界で初めて明らかにした。本研究は、Dp71abの産生を促すためエクソン７１と７８の２エクソンのスキッピングを同時に誘導する化合物を同定する。そのため、遠隔２エクソンのスプライシングを解析する２蛍光ミニ遺伝子を作製し、蛍光発光法を応用したハイスループット法によりその化合物を探索する。さらに、同定した化合物をヒト筋芽細胞に投与し、Dp71ab産生増加による細胞の増殖を明らかにする。その成果は、化合物を用いた筋芽細胞の増殖治療法の確立を大きく促進する。初年度において、遠隔２エクソンのスプライシングを解析する２蛍光ミニ遺伝子の作製を図った。すでにエクソンスキッピング検出を迅速容易にはかるmCherry赤色とeGFP緑色の2色蛍光発光ミニ遺伝子のFMv2を保有している。そこで、このFMv2をさらに改良し、遠隔２エクソンの スプライシングを同時にしかも定量的に解析する多エクソン２蛍光ミニ遺伝子の構築を目指した。まず、エクソン７１と７８の配列をそれぞれ別個にFMv2に挿入したミニ遺伝子を構築した。ところが、予想に反してエクソン７１と７８はともにスプライシングを受けなかった。これは、２つのエクソンがサイズの小さなミニエクソンであることに起因していると考え、FMv2に挿入する配列のサイズを変更したミニ遺伝子を各種作製し、最適のスプライシング解析系の構築を目指している。一方、DP71abが筋芽細胞特異的増殖因子であることを明らかにした成果をまとめ、論文として発表した。