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アミロイド形成を理解する相分離仮説の実証と共溶質の開発

证明相分离假说和开发共溶质以了解淀粉样蛋白的形成

基本信息

批准号：
22K19284
负责人：
白木賢太郎
金额：
$ 4.16万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-06-30 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、アミロイド線維による固い凝集体の形成の途中に液滴を形成するという仮説を実証することを目的としている。タンパク質分子間の相互作用を可視化し、同時に制御するために、申請者がこれまで開発してきた凝集抑制剤を用いる。初年度の目標として、酵母プリオンSup35を対象に、このタンパク質が液滴や凝集体などの集合状態を形成する条件を明らかにし、それぞれの形成に共溶質が影響をおよぼすかどうかを定量化できるかどうかを実験した。Sup35は線維の形成の鍵となるNMドメインに、精製しやすいための7残基のヒスチジンからなるヒスチジンタグを結合させたSup35NM-7Hisを対象にした。このタンパク質を精製し、液滴や凝集体を形成をさせる条件をさまざまな添加剤の共存化で探索した。その結果、特定のタイプの中性クラウダーを共存させることでSup35NM-7Hisが液滴を形成させる条件を明らかにすることができた。液滴を形成させる条件の中でも、中性クラウダーの構成単位となる化合物では液滴を形成しないことも確認できた。以上の結果、溶液添加剤を組み合わせることで、液滴を形成させる条件や、凝集体を形成させる条件を明らかにすることができた。予想していなかった欠陥として、Sup35NM-7Hisが液滴を形成する条件で塩化ナトリウムを添加すると時間とともにゲルのような状態に成熟するような挙動も観察することができた。一方で、電荷を持つポリマーの効果を調べると、Sup35NM-7Hisと会合することで液滴ではなく凝集体になる傾向が高かった。以上の結果、時間的な経緯として先に液滴を形成し、その後、凝集体を形成していくような成熟させる条件も明らかにすることができた。

In this study, the formation of liquid droplets on the way to the formation of solidified aggregates was studied in this study. The interaction between molecules and molecules can be controlled at the same time, and the applicant is responsible for the inhibition of agglutination. At the beginning of the year, there was an increase in the number of droplets, such as Sup35, yeast, droplets, condensates, aggregates, and cosolubilities. in the beginning of the year, yeast, yeast, Sup35 spools are known to be sensitive to NM symptoms. They are known to have 7 residues. To combine Sup35NM-7His images, seven residues are known to be sensitive. The liquid droplet "condensate" forms the liquid droplet "conditions", "coexist", "explore" and "add". The results show that the droplets of the droplets of the Sup35NM-7His droplets coexist in different conditions, and the conditions are clear. In the conditions for the formation of liquid droplets, the liquid droplets were formed by the formation of liquid droplets in the conditions for the formation of liquid droplets. The above results, the addition of solution, the formation of liquid droplets, the formation of liquid droplets, the formation of condensate, the formation of liquid droplets, and the formation of condensate. If you want to make sure that you do not have enough information, Sup35NM-7His droplets are not available, and you want to change the conditions of your droplets, you need to add a real-time monitoring system that is in a state of maturity. On the one hand, the electric charge will lead to high temperature. The droplets of the liquid droplets will be condensed and condensed in the same direction as the Sup35NM-7His. According to the above results and time, the liquid droplets are formed before the formation of the liquid droplets, and then the condensation collective is formed after the formation of the liquid droplets.