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アミロイド形成を理解する相分離仮説の実証と共溶質の開発

证明相分离假说和开发共溶质以了解淀粉样蛋白的形成

基本信息

批准号：
22K19284
负责人：
白木賢太郎
金额：
$ 4.16万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-06-30 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、アミロイド線維による固い凝集体の形成の途中に液滴を形成するという仮説を実証することを目的としている。タンパク質分子間の相互作用を可視化し、同時に制御するために、申請者がこれまで開発してきた凝集抑制剤を用いる。初年度の目標として、酵母プリオンSup35を対象に、このタンパク質が液滴や凝集体などの集合状態を形成する条件を明らかにし、それぞれの形成に共溶質が影響をおよぼすかどうかを定量化できるかどうかを実験した。Sup35は線維の形成の鍵となるNMドメインに、精製しやすいための7残基のヒスチジンからなるヒスチジンタグを結合させたSup35NM-7Hisを対象にした。このタンパク質を精製し、液滴や凝集体を形成をさせる条件をさまざまな添加剤の共存化で探索した。その結果、特定のタイプの中性クラウダーを共存させることでSup35NM-7Hisが液滴を形成させる条件を明らかにすることができた。液滴を形成させる条件の中でも、中性クラウダーの構成単位となる化合物では液滴を形成しないことも確認できた。以上の結果、溶液添加剤を組み合わせることで、液滴を形成させる条件や、凝集体を形成させる条件を明らかにすることができた。予想していなかった欠陥として、Sup35NM-7Hisが液滴を形成する条件で塩化ナトリウムを添加すると時間とともにゲルのような状態に成熟するような挙動も観察することができた。一方で、電荷を持つポリマーの効果を調べると、Sup35NM-7Hisと会合することで液滴ではなく凝集体になる傾向が高かった。以上の結果、時間的な経緯として先に液滴を形成し、その後、凝集体を形成していくような成熟させる条件も明らかにすることができた。

The purpose of this study is to establish the formation of solid aggregates and the formation of droplets in the process of forming solid aggregates. Visualization of the interaction between the molecules of the タンパク substance, simultaneous control of the interaction, and application of the applicant's agglutination inhibition method. The goal for the first year is the formation of the target of the first year, the yeast プリオンSup35 を対Elephant, and the このタンパク性が Liquid droplet やaggregate などのaggregation state をThe influence of するconditions, を明らかにし, それぞれの, and the formation of co-solutesをおよぼすかどうかをquantificationできるかどうかを実験した. Sup35 Line Dimension Forming Key NM ドメインに、Refined 7-residue しやすいための7チジンからなるヒスチジンタグをcombination させたSup35NM-7Hisを対 resembles にした. The quality of the material is refined and the conditions for the formation of droplets and agglomerates are also explored.そのRESULT, SPECIFIC のタイプのneutral クラウダーを coexistence させることでSup3 5NM-7His liquid droplets are formed according to the conditions and conditions. The formation of droplets is based on the condition of the medium, and the formation of neutral compounds is the same as that of the neutral compounds. The formation of droplets is confirmed by the conditions. As a result of the above, the conditions for adding a solution to a solution, the conditions for forming a droplet, and the conditions for forming an agglomerate are the same. The conditions for the formation of droplets of Sup35NM-7His and the conditions for the formation of droplets of Sup35NM-7Hisウムをaddedすると时とともにゲルのようなSTATUSに matureするような挙动も観看することができた. One party, charge holder and effect べると, Sup35NM-7His fusion and droplet ではなく agglomerate になる tendency and high かった. The results of the above, the time of formation, the formation of droplets, and the formation of aggregatesをformationしていくようなripeさせるconditionsも明らかにすることができた.