Clinical significance of microvesicles in acute liver injury in critically ill patients

本研究は1)ALFにおける重症度・予後予測因子としてのMVの有用性の検討、2)ALIの成因と病期の違いによるMV profileの影響についての検討、3)ALIの検体に含まれるMVを用いたバイオアッセイ系の確立を主な目標としており、本年度は3)を中心に研究を進めた。MVはsubtype毎に内容物や生理活性が異なっており、バイオアッセイ系を用いてMVの役割を解明するためには、同じ親細胞由来のMVを分離することが重要である。我々は、主に好中球由来MVの分離に取り組んだ。具体的には、日本赤十字社からの研究用に提供された全血製剤を用いて、遠心分離とMagnetic cell sorting(MACS)法を組み合わせて、好中球由来MVの分離を行った。プロトコールの工夫を重ねて、結果的に回収率 37%、割合が91.2%と純度の高い好中球由来MVの抽出に成功した。今後は、この技術を用いて患者やマウスに由来する好中球由来MVの生物学的活性についてバイオアッセイ系を用いて検討する。上記に加えて、我々はALFにおける更なるMV Subtypeを解析した。アセトアミノフェン(APAP)投与によって作成したマウスALFモデルにおいて、肝細胞由来MVを測定してところ、小児ALF患者と同様にALFモデルマウスでは対照と比べてMV数が増加する傾向を示した。一方で、血小板由来MVについては小児ALF患者及びALFモデルマウスにおいて、対照と比べてMV数が著しく低下していることが判明した。このことから、MVはsubtype毎に異なる挙動を示しており、subtype毎に病態に与える影響が異なっていると考えられ、MVの役割の解明にはMV分離による生物活性評価が重要であると考えられる。今後は臨床検体及びマウスによる追加実験を行いながら、バイオアッセイによる評価を継続的に進めていく予定である。

本研究は1)ALFにおける重症度・予後予測因子としてのMVの有用性の検討、2)ALIの成因と病期の違いによるMV profileの影響についての検討、3)ALIの検体に含まれるMVを用いたバイオアッセイ系の確立を主な目標としており、本年度は3)を中心に研究を進めた。MVはsubtype毎に内容物や生理活性が異なっており、バイオアッセイ系を用いてMVの役割を解明するためには、同じ親細胞由来のMVを分離することが重要である。我々は、主に好中球由来MVの分離に取り組んだ。具体的には、日本赤十字社からの研究用に提供された全血製剤を用いて、遠心分離とMagnetic cell sorting(MACS)法を組み合わせて、好中球由来MVの分離を行った。プロトコールの工夫を重ねて、結果的に回収率 37%、割合が91.2%と純度の高い好中球由来MVの抽出に成功した。今後は、この技術を用いて患者やマウスに由来する好中球由来MVの生物学的活性についてバイオアッセイ系を用いて検討する。上記に加えて、我々はALFにおける更なるMV Subtypeを解析した。アセトアミノフェン(APAP)投与によって作成したマウスALFモデルにおいて、肝細胞由来MVを測定してところ、小児ALF患者と同様にALFモデルマウスでは対照と比べてMV数が増加する傾向を示した。一方で、血小板由来MVについては小児ALF患者及びALFモデルマウスにおいて、対照と比べてMV数が著しく低下していることが判明した。このことから、MVはsubtype毎に異なる挙動を示しており、subtype毎に病態に与える影響が異なっていると考えられ、MVの役割の解明にはMV分離による生物活性評価が重要であると考えられる。今後は臨床検体及びマウスによる追加実験を行いながら、バイオアッセイによる評価を継続的に進めていく予定である。