In vivo comprehensive genome editing analysis to elucidate the mechanisms of cancer refractoriness for development of novel therapies

体内综合基因组编辑分析，阐明癌症难治性机制，以开发新疗法

• 批准号: 22K19554
• 负责人: 田中 真二
• 金额: $ 4.16万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-06-30 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K19554/
• 关键词: ゲノム編集; 難治性がん; 播種転移; 肝転移; 免疫逃避; 腫瘍関連線維芽細胞(CAF); CAR-T; 免疫疲弊; 膵癌

近年のゲノム編集技術の開発によって大きな技術革新が生まれており、治療開発への応用が期待されている。申請者は挑戦的研究(萌芽)H30-R1/R2-3年度により高効率多重ゲノム編集技術を開発し、ヒト・マウス初代培養細胞およびCAR-T細胞へ同時に複数の遺伝子変異を導入する革新的手法に成功した(Int J Cancer 2019, Carcinogenesis 2019, 2020, EBioMedicine 2020, Sci Rep 2021)。本研究では、高効率ゲノム編集技術をin vivo CRISPR/Cas9 sgRNA library導入へ応用し、膵癌細胞の網羅的ゲノム編集解析により転移能獲得機序を解明し、CAR-T細胞の網羅的ゲノム編集解析により膵癌組織への免疫浸潤機序を解明する。癌細胞および免疫細胞の両面から膵癌の難治性機序を明らかにして、新規治療法を開拓する挑戦的課題である。(1)膵癌細胞のin vivo網羅的ゲノム編集解析による転移能獲得機序の解明と治療開発C57BL/6マウス由来KrasG12DTrp53R172H膵癌株KPC (Dr. David Tuvesonより分与)にマウスsgRNA library (lentiCRISPRv2; 20,611遺伝子+Cas9)を導入して転移腫瘍を作成し、転移制御に関わる候補遺伝子群を抽出して、腫瘍免疫微小環境の解析を進めている。(2)CAR-T細胞のin vivo網羅的ゲノム編集解析による免疫浸潤機序の解明と治療開発膵癌を標的とするMSLN-CARベクターとマウスsgRNA library (lentiCRISPRv2)をC57BL/6マウスＴ細胞に導入し、MSLN+ KPCマウス膵癌を同所性移植した担癌マウスにCAR-T治療を施行して、免疫浸潤制御に関わる候補遺伝子群を抽出し、分子生物学的解析を進めている。

In recent years, great technological innovation has been produced in the development of editing technology, and the application of therapeutic development has been expected. The applicant has successfully developed innovative methods for introducing multiple gene variants into primary cultured cells and CAR-T cells (Int J Cancer 2019, Carcinogenesis 2019, 2020, EBioMedicine 2020, Sci Rep 2021). In this study, high-efficiency genome assembly techniques were used for in vivo CRISPR/Cas9 sgRNA library introduction, genome analysis of cancer cell traps, elucidation of migration acquisition mechanisms, and elucidation of CAR-T cell trap and genome analysis of immune infiltration mechanisms in cancer tissues. Cancer cells and immune cells face the challenge of understanding the refractory mechanisms of cancer and developing new therapies (1)C57BL/6 is derived from KrasG12DTrp53R172H cancer strain KPC (Dr. David Tuveson) and introduced into the sgRNA library (lentiCRISPRv2; 20,611 gene +Cas9). (2) Analysis of CAR-T cell in vivo repertoire, elucidation of immune infiltration mechanisms and development of cancer targets, MSLN-CAR library (lentiCRISPRv2), introduction of C57BL/6 T cells, MSLN+ KPC, co-transplantation of CAR-T cells, development of CAR-T therapy, extraction of candidate gene subsets related to immune infiltration control, and analysis of molecular biology.

项目成果

Biomarker research and clinical application for treatment of hepato-biliary-pancreatic cancer (Workshop)

肝胆胰癌治疗的生物标志物研究及临床应用（研讨会）

• 发表时间: 2022
• 作者: Asano Daisuke;Kudo Atsushi;Akahoshi Keiichi;Maekawa Aya;Murase Yoshiki;Ogawa Kosuke;Ono Hiroaki;Ban Daisuke;Tanaka Shinji;Tanabe Minoru;Shinji Tanaka;Shinji Tanaka
• 通讯作者: Shinji Tanaka

RTP4 silencing provokes tumor-intrinsic resistance to immune checkpoint blockade in colorectal cancer

RTP4沉默引发结直肠癌中肿瘤对免疫检查点阻断的内在抵抗

• DOI: 10.1007/s00535-023-01969-w
• 发表时间: 2023
• 期刊: Journal of Gastroenterology
• 影响因子: 6.3
• 作者: Yamamoto Y;Shimada S;Akiyama Y;Tsukihara S;Sugimoto R;Kabashima A;Tokunaga M;Kinugasa Y;Kawakami Y;Tanaka S
• 通讯作者: Tanaka S

分子腫瘍医学研究室ホームページ

分子肿瘤学实验室主页

Molecular and immunological mechanisms of liver cancer; preclinical studies for clinical application (Workshop)

肝癌的分子和免疫学机制；

• 发表时间: 2022
• 作者: Asano Daisuke;Kudo Atsushi;Akahoshi Keiichi;Maekawa Aya;Murase Yoshiki;Ogawa Kosuke;Ono Hiroaki;Ban Daisuke;Tanaka Shinji;Tanabe Minoru;Shinji Tanaka
• 通讯作者: Shinji Tanaka

ゲノム研究の両輪に基づく臨床応用への展開（特別企画）

基于基因组研究两大支柱的临床应用开发（专项）

• 发表时间: 2022
• 作者: Asano Daisuke;Kudo Atsushi;Akahoshi Keiichi;Maekawa Aya;Murase Yoshiki;Ogawa Kosuke;Ono Hiroaki;Ban Daisuke;Tanaka Shinji;Tanabe Minoru;Shinji Tanaka;Shinji Tanaka;田中真二
• 通讯作者: 田中真二