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細胞不死化とがん遺伝子導入による形質転換

通过细胞永生化和癌基因导入进行转化

基本信息

批准号：
60015054
负责人：
藤原美定
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1985
资助国家：
日本
起止时间：
1985 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は最も形質転換の困難とされているヒト2倍体線維芽細胞のX線照射による部分形質転換と特異的染色体再編成および増殖制御に関連する発癌遺伝子の発現について明らかにし、さらにc-onc導入によって不死化や癌化形質獲得を目的とする一方、不死10T1/2細胞へのc-onc導入による癌性転換を目的とした。ヒト2倍体線維芽細胞では、400-600ラドX線の単一・反復照射によって、細胞寿命の延長のみを示す第1グループ、細胞寿命の延長はないが細胞形態の変化、フォーカス形成能と寒天内(AI)増殖能をもつクローン(第2グループ)及び、上記4転換形質をすべてもつ第3グループに部分転換クローンが得られた。染色体研究は、第1グループは第22染色体のc-sis局在近傍や第1染色体のN-ras,Boym近傍に相互転座切断点を、第3グループは特異的転座t(1;5)を、第2グループは正常2倍体をもつことを示した。細胞性発癌遺伝子の発現をDNA/mRNAドット法で検討すると、細胞寿命の延長した第1・3グループではc-mycの活性化がみられ、形態変化とフォーカス・AI増殖能を示す第2・3グループはBlym活性が著しく上昇し、myc活性が細胞寿命の延長や不死化に寄与し、その他の癌形質の表現にはBlym活性が関与することが示唆された。外来遺伝子導入頻度の高い第2グループ細胞に細胞性発癌遺伝子(DNA結合性、細胞膜性増殖因子性)を単独・組合わせで導入した結果、c-myc導入によって形質転換フォーカス形成能が顕著に増加し、細胞寿命も著しく延長し、不死化と癌形質を示すようになった。このクローンのサザンブロット分析はゲノムあたり数10コピーニ増巾したc-myc DNAを保持した。X線+コルセミド処理による異数性導入も著しい細胞寿命の延長を起こした。c-myc活性の比較的高い不死10T1/2細胞への活性化T24c-H-rasの導入は強力にタイプ3に形質転換させ、ゲノムに1〜数コピーのH-ras遺伝子をもっていた。

In this study, the most difficult aspect of morphological transformation was the X-ray irradiation of diploid cells, the partial morphological transformation, the specific chromosome reorganization and the proliferation control related to the development of cancer genes, and the introduction of c-onc into 10T1/2 cells. The cell morphology, cell growth and proliferation of diploid cells were observed in 400-600 ° X-ray irradiation. The cell morphology was observed in 400-600 ° X-ray irradiation. The cell morphology was observed in 400 - 600 ° X-ray irradiation. Chromosome studies showed that chromosome 22 c-sis was located near chromosome 1 N-ras,Boym, and the third chromosome c-sis was located near chromosome 1 N-ras,Boym, and the third chromosome c-sis was located near chromosome 1 N-ras. DNA/mRNA analysis of cellular oncogene expression, extension of cell life span, 1.3.1. c-myc activation, morphological changes, AI proliferation, 2.3.2. Blym activity, myc activity, extension of cell life span, inactivation, and expression of other oncogenes. The frequency of foreign gene introduction was the second highest among cellular cancer promoters (DNA binding, cell membrane growth factor). The results of single combination of introduction, c-myc introduction, morphological and qualitative transformation, and formation of tumor cells increased, cell life expectancy prolonged, and cancer cells did not die. The analysis of the protein was carried out at 10 ° C and the c-myc DNA was preserved. X-ray + UV treatment of different number of cells introduced to prolong the life span of cells. c-myc activity is relatively high in 10T1/2 cells and the activation of T24c-H-ras is introduced into the cells with a strong effect on the quality of the cells.