DNA複製開始における起点DNA構造と複製開始蛋白との相互作用

DNA复制起始过程中起始DNA结构和复制起始蛋白之间的相互作用

• 批准号: 60224003
• 负责人: 岡崎 恒子
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Special Project Research
• 财政年份: 1985
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1985 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-60224003/
• 关键词: DNA複製; 複製開始; oriC; プラスミド

1981年、Fullerらによって大腸菌染色体の複製開始点(OriC)を持ったプラスミドの複製を粗酵素画分を用いて試験管内で行なわせる系が開発された。その後、複製開始反応およびその制御の分子機構を解明なべく、この系の解体再構成が進められ、現在、ある程度忠実に生体内の開始反応を反映した再構成系が得られている。本年度は反応生成物の解析を中心とした研究を行ない、以下の結果を得た。1.再構成系の検定 再構成系での反応はdnaA蛋白を含む11種類の複製蛋白およびoriCDNAに良い依存性を示す。また【oric^-】DNAは鋳型活性を持たない。複製は超二重らせん(Form【I】)DNA上で開始し、Θ型分子を経て開環型(Form【II】)DNAになる。合成された娘鎖DNAの約半分はfull sizeの長さを持ち、残りの半分はfull sizeから数百塩基の長さに幅広く分布している。以上の結果は再構成系での反応がかなり忠実に生体内および粗酵素画分での反応を反映していることを示している。2.RNA合成の要求性 複製開始にはRNA合成が必要である。このRNA合成が行なわれる際に他の複製蛋白が存在する必要があることが判明した。3.転写開始部位の同定 S1マッピング法を用いてoric近傍での転写開始部位を同定した。最少必須領域およびその近傍に左向きの転写開始部位があることが判明した。右向きの転写開始は検出されなかった。現在より詳細な解析を継続中である。4.プライミングおよびDNA合成開始部位のマッピング S1マッピング法によりoriC付近におけるDNA合成開始部位およびRNAプライミング部位のマッピングを行なっている。oriC内に左向きのDNA合成開始点が多数検出されており、より詳細な解析を継続中である。

In 1981, the starting point of chromosome replication of Fullerella spp. (OriC) was used to copy the crude enzyme drawing in the tube. After the accident, the molecular mechanism of the control system has been established, and the system has been disintegrated and reorganized into an advanced one. Now, the level of loyalty in the body begins to reflect the reconstitution of the system. This year, the center for the analysis of inverse products has conducted a comprehensive study, and the following results have been successful. 1. The reconstructed line is stable and reconstructed. The reverse dnaA protein contains "11" type replicative protein and shows good oriCDNA dependence. The activity of the compound [oric ^ -] DNA type is stable. A copy of the Form [I] DNA is launched, and the Form [II] DNA is opened. Synthesize the mother-of-the-mother DNA, the half-split full size, the long-term, the residual, the full size, the hundreds of bases, the distribution, the size, the length, the length, the The above results show that the system is divided into two parts: the crude enzyme picture in the body, the analysis, the reflection, the reflection, the response, the composition, the analysis, the analysis and the analysis. 2.RNA synthesis requirements sexual replication begins to implement the RNA synthesis requirements. In the RNA synthesis line, it is necessary to determine the presence of other copies of the protein. 3. The beginning of writing is the same as that of S1, and the starting position of writing is the same as that of writing near the oric. At a minimum, it is necessary to make a decision at the beginning of the left-hand writing system. Write to the right and start to send out the download button. We are now in the process of analyzing the situation. 4. This is the first step in the DNA synthesis process. The first part of the RNA synthesis process is the first step of the RNA synthesis. The first part of the RNA synthesis is close to the beginning of the RNA synthesis. In oriC, most of the left-hand DNA synthesis starting points are out of the box, and the data are analyzed in the middle of the window.

项目成果

Nucleic Acids Res.13-19. (1985)

核酸研究 13-19。

Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 82-11. (1985)

美国国家科学院院刊。