セントロメアヘテロクロマチンを構成する機能構造の解析

着丝粒异染色质功能结构分析

基本信息

  • 批准号:
    61228005
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 0.77万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Special Project Research
  • 财政年份:
    1986
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1986 至 无数据
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

1.染色体セントロメア領域の分離分画法の確立:染色体動原体領域の同定には抗セントロメア抗体活性をもつ強皮症患者の血清を使用した。M期HeLa細胞より染色体を分離精製し、0.3MNaCL存在下で制限酵素Sau3AIを作用させ、抗原の局在する染色体動原体領域の構造は残したまま他領域染色体構造を完全に分解することに成功した。この分解物を庶糖濃度勾配中で遠心分画して、含動原体染色体断片を分離した。(セントロメア分画)。2.抗原蛋白分子量の決定:セントロメア分画に存在する蛋白をWestern-blot法によって解析し、分子量17kd,82kd,140kdの抗原分子が存在することを見出した。又間期核抽出物中には17kd抗原のみが見出された。3.17kd抗原の部分精製:HeLaの細胞単離核をDNase処理後、2MNaCLを用いて核蛋白を抽出、次でハイドロキシアパタイトカラムを用いて分画した。17kd蛋白は2MNaCL-0.1MK-PO4溶出画分に回収された。4.セントロメア分画由来DNAライブラリイの作成:セントロメア分画由来DNAをλgt10に組込んだDNAライブラリイを作成した。5.In situ hybridizationによるセントロメア由来DNAクローンの解析:上記ライブラリイからin situ hybridizationによりセントロメア領域由来のクローンを選別した。7〜8種の染色体セントロメア領域と特異的にハイブリダイズするクローン1個を得た。このクローンのDNA配列中にはalphoid配列が存在していた。alphoid配列と抗原蛋白とは間期核においても同一部位に存在することが二重染色によって確認された。
1. Establishment of chromosome chromosome mapping: identification of chromosome kinetosome domains, anti-chromosome antibody activity and use of sera from scleroderma patients The chromosome of HeLa cell in M phase was isolated and purified. In the presence of 0.3 M NaCl, the restriction enzyme Sau3AI acted on the chromosome and the antigen was completely decomposed in the chromosome domain. The results showed that the concentration of glucose in the disintegrant was matched with that in the telecentric analysis, and the chromosome fragments containing the kinetosomes were isolated. (See below for details.) 2. Determination of molecular weight of antigen protein: Western blot analysis of protein with molecular weight of 17kd,82kd and 140kd was performed. The 17kd antigen was found in the interphase nuclear extract. 3.Partial purification of 17kd antigen:HeLa cells isolated from the nucleus, DNase treatment, 2M NaCl, nuclear protein extraction, secondary separation, and purification. 17kd protein 2MNaCL-0.1MK-PO4 dissolution analysis 4. The origin of the DNA fragment is composed of DNA fragments. 5. In situ hybridization analysis of the origin of DNA samples: note the origin of DNA samples in situ hybridization analysis. 7 ~ 8 kinds of chromosomes are obtained from the domain specific chromosomes. In the DNA sequence of this species, there is no alphoid sequence. Alphoid alignment and antigen protein were identified by double staining in the same site.

项目成果

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    Grant-in-Aid for JSPS Fellows
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知道了