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ブタ卵に存在する精子リセプター蛋白をコードするRNAの同定

猪卵中编码精子受体蛋白的 RNA 的鉴定

基本信息

批准号：
61570790
负责人：
泰井俊造
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1986
资助国家：
日本
起止时间：
1986 至 1987
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-61570790/
关键词：
豚卵透明帯精子リセプター mRNA

项目摘要

昭和62年度の研究計画としては前年度に達成された(1)豚卵に対する各種抗体作製, (2)豚卵からのintactなRNAの抽出法の開発に基づき, より大量のRNAを抽出し, それを鋳型として無細胞蛋白合成系で蛋白合成を行ない, 合成蛋白と(1)の抗体との間で免疫沈降物を作り, 豚卵の精子リセプター蛋白のRNAの同定を行なうことにあった. 今年度preliminaryに免疫沈降物をSDS-ゲル電気泳動法により分析したところ, 特異的なバンドが得られなかった. そこで更にRNA抽出をscale-upし, より高い放射性活性を有する合成蛋白を用いて実験を重ねるべく準備を進めていたところ, J.Deaniによるマウス透明帯精子リセプター蛋白(ZP-3)のクローニングの論文が発表された(PNAS, 83, 4343, 1986). そこで実験計画を変更し, Deanらの発表したcDNA sequenceの一部(42mer)を合成し, マウスのgene bankからこの合成42merとhybridするgene fragmentをクローニングし, これを用いて豚ZP-3のクローニングを行うべく実験を進めている. 現在42merとhybridするgene fragmentのスクリーニング中である.

The research plan of the Showa 62 year was completed in the previous year (1) Production of various antibodies using dolphin eggs, (2) Extraction method of dolphin eggs using intact RNA, andよりA large amount of RNA is extracted, それを鋳 type として cell-free protein synthesis system でprotein synthesis を row ない, synthetic protein と (1) のantibodies とので immune sedimentation をり, Dolphin egg の sperm リセプターprotein のRNA の同定を行なうことにあった. This year's preliminary analysis of immunosediments by SDS-German electrophoresis method, Special なバンドが得られなかった. そこでにRNA extractionをscale-upし,より高いRADIOTACTIVE を有するSYNTHETIC PROTEIN を Use いて実験を重ねるべく to prepare を入めていたところ, J.Deani's paper on transparent spermatozoa sperm protein (ZP-3) (PNAS, 83, 4343, 1986).そこで実験计划を変正し, Deanらの発表したcDNA sequenceの一一(42mer)を综合し, マウスのgene bankからこの综合42merとhybridするgene fragmentをクローニングし,これを用いてdolphinZP-3のクローニングを行うべく実験を入めている. Now 42merとhybridするgene fragmentのスクリーニング中である.