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イネ染色体ライブラリー作製のための基礎的研究

水稻染色体库构建基础研究

基本信息

批准号：
61480034
负责人：
倉田のり
金额：
$ 4.48万
依托单位：
Fujita Health University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (B)
财政年份：
1986
资助国家：
日本
起止时间：
1986 至 1987
项目状态：
已结题

项目摘要

当該研究は, イネ染色体上での遺伝子座決定を, in situハイブリダイゼーションの手法を用いて行ない, 各染色体別のジーンライブラリー作製の際の基点を作ることを目的とした. 用いる遺伝子, あるいはDNA断片は, すでに他の研究によりクローン化されたもの, およびcDNAライブラリーより単離したいくつかのDNAを用いた. ライブラリーの基点とするため, 用いるDNAはゲノム中に単一コピーの配列のものを選んだ.イネでは, 染色体標本化が容易ではなく, in situハイブリダイゼーションの成功例もなかったので, まずハイブリダイゼーションの効率を上げるための条件設定を行った. 染色体標本は焔火乾燥法で作製後期日を置かず用いること. 3Hラベルするプローブは, dN(A,T,G,C)TPで多量ラベルするよりも用いるDNAをいくつかのサブクローンに分け, すべてのサブクローンにベクターDNAでを連結したまの状態で用いた方がよい結果を得られた.用いた遺伝子のうち, イネ貯蔵タンパクのグルテリン遺伝子, および57Kd貯蔵タンパクをコードする遺伝子について, 染色体上の座乗位置を決定できた. グルテリン遺伝子は, K2染色体短腕中部に座乗していることを検出した. 但し, 他染色体上の一部にもハイブリダイゼーション銀粒子の出現している部分があり, この領域にグルテリン遺伝子のサブファミリーの存在する可能性が示唆された. 57Kdタンパク遺伝子は, サザンハイブリダイゼーションによりゲノム内に単一コピーで存在することがわかり, in situハイブリダイゼーションの結果, K1染色体長腕基部に座乗することが明らかとなった. この遺伝子では, 銀粒子の50%以上がこの部分に集中し, 他の領域での反応はみられなかった. 2つのクローン化遺伝子について, 染色体上の位置がわかり, 他のクローン化した遺伝子についても, いくつかの位置を決定できると考えられる.

When this study was carried out, the gene loci on the chromosomes were determined in situ, and the gene loci of each chromosome were determined in situ. DNA fragments are used in other research, including DNA sequencing, cDNA sequencing and DNA sequencing. The base point of the DNA sequence is selected from the DNA sequence. It is easy to change the chromosome, in situ. Chromosome drying method is used to control anaphase. 3H, D, N (A, T,G,C)TP, N (A,T,G, T, T,G, T, T) TP, N, N (A, T,G,C)TP, N, N (A, T, G, T, G, T, T) TP, N (A, T, T, G, T, G, T, T The gene sequence is used to generate the gene sequence, and the gene sequence is stored at 57Kd. The gene sequence is used to determine the locus position on the chromosome. K2 chromosome short arm middle position, K2 chromosome short arm middle position. However, the presence of silver particles in a portion of his chromosome indicates the possibility of the presence of silver particles in the region. 57. Kd is the result of a single chromosome in the base of the long arm of K1. More than 50% of the silver particles are concentrated in this area. 2. The position of the chromosome is determined by the position of the chromosome.