抗ガングリオシド・モノクローナル抗体によるメラノーマの免疫療法に関する基礎的研究

抗神经节苷脂单克隆抗体黑色素瘤免疫治疗的基础研究

基本信息

批准号：
62015104
负责人：
田井直
金额：
$ 1.02万
依托单位：
Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1987
资助国家：
日本
起止时间：
1987 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.抗ガングリオシド抗体(202)の樹立ヒトメラノーマ細胞株(M14)をBalb/cマウスに免疫して得られた(UCLA医学部入江礼子教授との共同研究). IgMクラスであった.2.202抗体のエピトープの同定 M14細胞の202抗原は熱処理,トリプシン処理にて安定な性質を示したので糖脂質が考えられた. 抗原活性はM14細胞より抽出したガングリオシド分画のみに検出され中性糖脂質分画には検出されなかった. このガングリオシドをTLCで展開しその抗原活性を免疫染色法と免疫粘着阻止テストで検索したところ,活性はモノシアロガングリオシドすなわちGM3とGM2に一致して検出された. ジシアロガングリオシドGD_3,GD_2には全く認められなかった. 次に糖脂質標準品22種類を用いてその反応性をELISAと免疫粘着阻止テストで調べた. 反応した糖脂質は9種でいずれも末端にSiaα2→3Galの2糖を持つモノシアロガングリオシドであり, GM4が一番強い反応性を示した. シアル酸はNーアセチル型とNーグリコリル型双方同程度に反応することが判明した. 尚,202抗体はM14細胞のNPー40可溶化糖蛋白質画分とは免疫沈降反応を示さなかった.3.202抗体の各種ヒト腫瘍細胞との反応性種々のヒト腫瘍細胞に対する反応性を免疫粘着テストにて調べた. メラノーマやその他の腫瘍細胞株とは強く反応したが, 正常組織(皮膚,肝,腎,筋肉,末梢血球等)とは全く反応しなかった.4.202抗体の細胞障害作用の検討 IgM抗体である202はヒト血清在存下M14細胞に対して非常に強い補体依存性細胞障害作用を有することが判明した. すなわち抗体濃度100ng/mlで1時間以内に約80%以上の細胞が障害を受けた. 一方抗体依存性細胞介在性細胞障害作用は全く認められなかった. 今後はヌードマウスに移植したヒトメラノーマ細胞等に対する抗腫瘍効果の検討が必要である. 最終的には臨床実験治療が不可欠となる.

1。通过免疫BALB/C小鼠（与加州大学洛杉矶分校医学院的Irie Reiko教授的合作研究）获得抗绞痛抗体（202）人类黑色素瘤细胞系（M14）。它在IGM类中。2。鉴定202种抗体的表位时，M14细胞中的202抗原在用热和胰蛋白酶处理处理时显示出稳定的特性，因此考虑了糖脂。仅在从M14细胞中提取的神经节苷脂馏分中检测到抗原活性，而在中性糖脂级分中不检测到抗原活性。使用TLC开发了这种神经节苷脂，并使用免疫染色和免疫粘附性抑制测试搜索其抗原活性，并与单次凝胶剂（即GM3和GM2）一起检测到该活性。 diaialoganglioside gd_3和gd_2。接下来，使用ELISA和免疫粘附性抑制测试，使用22个糖脂标准来研究其反应性。有九种类型的糖脂与单次凝胶剂与SIAα2→3Gal二糖反应，而GM4的反应性最强。发现唾液酸反应于N-乙酰基和N-甘油基类型的相同水平。此外，202抗体未与M14细胞的NP-40溶解化糖蛋白分数表现出免疫沉淀反应。3.202抗体具有各种人类肿瘤细胞的202抗体的反应性，使用免疫添加剂测试研究了202抗体对各种人肿瘤细胞的反应性。它与黑色素瘤和其他肿瘤细胞系有强烈反应，但与正常组织（皮肤，肝脏，肾脏，肌肉，外周血细胞等）完全没有反应。4。检查抗体的细胞毒性作用。 202，一种IgM抗体，发现对人血清中M14细胞具有非常强的补体依赖性细胞毒性作用。换句话说，在100 ng/mL的抗体浓度下，超过80％的细胞在1小时内损坏。另一方面，未观察到抗体依赖性细胞介导的细胞毒性作用。将来，有必要研究对移植到裸鼠的人黑色素瘤细胞的抗肿瘤作用。最后，临床实验治疗将变得至关重要。