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ガングリオシドを介する脳神経細胞死の機構解析

神经节苷脂介导的脑神经细胞死亡机制分析

基本信息

批准号：
08256243
负责人：
田井直
金额：
$ 0.96万
依托单位：
Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

我々は精製糖脂質などを免疫原とする効率の良い糖鎖抗体作製法を開発した。この方法を用いて、一連の抗糖鎖特異マウス単クローン抗体の樹立とその結合特異性の解析を報告している。医学、生命科学における糖鎖抗体の応用は多岐に渡る。中枢神経組織に大量に発現される糖鎖に焦点を絞っている。最初に、成熟および生後の発達過程のラット脳におけるガングリオシド(シアル酸含有スフィンゴ糖脂質)の局在・分布を免疫組織化学的に解析した。その結果、各ガングリオシドの発現は神経層や細胞に特異的であることを見いだした。続いて、ラット小脳初代培養神経細胞に発現される糖脂質も同様な手法により細胞特異的であることが判明した。上記結果は、糖鎖は神経細胞の分化抗原であり、有用なマーカーになることを示した。本年度は、これら糖鎖の機能解明を目的として、一連の抗糖鎖抗体の添加による細胞応答を検討した。各種抗体を培地に添加して細胞への効果を観察したが、何れの調製時期、培養時間および濃度においても顕著な影響(細胞分化・増殖・死、神経突起の伸展、細胞接着等)は認められなかった。この結果は、上記アプローチによるガングリオシドのシグナル伝達機構解析は容易でないことを示唆した。次に、糖鎖(GalCer)発現に関与する蛋白質のcDNAクローニングとその機能を解析した。ラット脳より調製したcDNAライブラリーより直接発現クローニング法を用いてp34A34を単離した。推定アミノ酸配列の解析結果は、転写調節または情報伝達因子の可能性を示唆した。更に、細胞への遺伝子導入により、形態変化の誘導、細胞増殖の低下が観察された。現在、この蛋白質の性状やこの機構を詳細に解析している。

I am a refined glycolipid immunogen and a highly efficient glyco-locked antibody production method. The method is based on the establishment and analysis of the binding specificity of the anti-glucose-lock specific MAKI antibody together with the report. Medicine and life sciences are used for sugar-locked antibodies. The central nervous system has a large number of sugar locks and a focus on the central nervous system. The first step, the mature step after birth, the process of development, and the process of development. Analysis of the localization and distribution of スフィンゴglycolipid) by immunohistochemistry of aramic acid. As a result, each ガングリオシドの発appears and the cells of the divine layer are specific and unique. The primary culture of 続いて and ラット小脳 was carried out using the same glycolipid method as the original culture of the God's cells, and the specific であることが was discovered. The results mentioned above, the differentiation antigen of sugar-locked cells, and the useful information are shown. This year, the purpose of elucidating the function of sugar locks is to clarify the functions of sugar locks, and to add anti-glucose lock antibodies to the cells and respond to them. The effect of adding various antibodies to the soil and cells, the preparation period, the culture time, and the concentration are all measured. The effects of the disease (cell differentiation, proliferation, death, extension of nerve protrusions, cell adhesion, etc.) are caused by the disease.このRESULTS は、上记アプローチによるガングリオシドのシグナル伝达 Mechanism analysis はでないことをshow唆した. Second, the detection of sugar lock (GalCer) and the analysis of the cDNA function of the protein. The ラット脳より modulated cDNA ライブラリーより is directly produced by the クローニング method using いてp34A34 を単leave. The results of the analysis of the presumed aminic acid ligation and the likelihood of the adjustment factors are indicated. Update, introduction of cells, induction of morphological changes, and reduction of cell proliferation. Now, the detailed analysis of the protein's properties and mechanism is done.