高次神経機能に関与する糖鎖結合蛋白質の同定

鉴定参与高级神经功能的碳水化合物结合蛋白

• 批准号: 09240242
• 负责人: 田井 直
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09240242/
• 关键词: 糖鎖結合蛋白質; ガングリオシド; モノクローナル抗体; ラット脳

最初に、成熟ラット小脳可溶化膜蛋白質中には、各ガングリオシドをリガンドとしたELISAとWestern blotによるアッセイからガングリオシドGT1b糖鎖を認識する膜蛋白質が存在することを確認した。次に、これら分子のより詳細な性状を明らかにするために、GT1b糖鎖結合蛋白質に対する特異的単クローン抗体の作製を行った。GT1b結合実験で得られた結果を基に、各蛋白質の分子量を指標とした抗体スクリーニングを行いYAK-2抗体(lgM)を得た。YAK-2抗体は、主に相対分子量160-、90-、58-、42-kDaの各分子と反応した。この抗体認識分子群はGT1b結合実験で検出した分子群と分子量的に極めて類似していた。そこで、YAK-2抗体認識分子とGT1b結合分子の同一性について検討した。各種ガングリオシド存在下におけるYAK-2抗体の小脳可溶化膜蛋白質に対する反応性について解析したところ、GT1b存在下で明らかにYAK-2抗体の小脳可溶化膜蛋白質に対する反応が阻止された。一方、他の糖脂質では反応阻止効果が認められなかった。この結果は、YAK-2抗体とGT1bが認識する分子群が同一であることを示唆する。YAK-2抗体の認識エピトープが各分子の蛋白質部分であることは各分子のメタ過よう素酸ナトリウム処理後の反応性から確認した。現在、これら分子の構造ならびに機能を明らかにするため、YAK-2抗体を用いた発現クローニング法により各分子(160-、90-、58-kDa)の遺伝子クローニングを遂行している。具体的には、ラット脳cDNAファージライブラリーを用いての抗体によるクローニングである。クローニング後、各組識や細胞に特異的に発現されるガングリオシド結合蛋白質の機能解析を予定している。

In the initial stage, the soluble membrane protein is known to exist in ELISA, Western blot, GT1b sugar, membrane protein, and so on. The specific antibody of GT1b glycoprotein binding protein was used as a marker for the detection of molecular and molecular traits. The results of GT1b and Elisa showed that the molecular weight of each protein was determined by YAK-2 antibody (lgM). The molecular weights of YAK-2 antibody, master phase and 42-kDa antibody are 160 -, 90 -, 58-and 100%, respectively. The molecular weight of the antibody group is similar to that of the antibody group, which is similar to that of the molecular weight of the antibody group, the GT1b is used to detect the molecular weight of the cluster. Antigens, YAK-2 antibody molecules, GT1b binding molecules, identity genes, antigens, antibodies, antibodies In the presence of all kinds of antigens, YAK-2 antibodies are soluble, membrane proteins are soluble, YAK-2 antibodies are not soluble, YAK-2 antibodies are not soluble in the presence of antigens. On the one hand, he tries to prevent him from getting rid of the disease. The results showed that the molecular group of YAK-2 antibody GT1b antibody was the same as that of the same antibody. YAK-2 antibodies were detected by Elisa. The proteins of each molecule were partially purified. The molecules were confirmed by reactionism after the treatment of amino acid. At present, the molecular device can be used to detect the molecular weight of each molecule (160 -, 90 -, 58-kDa) and to detect the antibody against YAK-2. Specific antigens, antibodies, cDNA, antibodies, antibodies. After a lot of information, the special information of each group can be used to analyze the predetermined data by combining the protein binding machine.

项目成果

Sorice,M.: "Evidence for the existence of ganglioside enriched plasma membrane domains in human peripheral lymphocytes." J.Lipid.Res.38. 969-974 (1997)

Sorice,M.：“人外周淋巴细胞中存在富含神经节苷脂的质膜结构域的证据。”

Kotani,M.: "An immunohistochemical technique with a series of monoclonal antibodies to gangliosides." Brain Res.Prot.1. 152-156 (1997)

Kotani,M.：“一种使用一系列神经节苷脂单克隆抗体的免疫组织化学技术。”

Nohara,K.: "Gangliosides involved in activation of rat T-lineage cells." Biochim.Biophys.Acta. 1345. 207-214 (1997)

Nohara,K.：“神经节苷脂参与大鼠 T 谱系细胞的激活。”

Tai,T.: "Cell type-specific expression of ganglioside antigens in the central nervous system" Pure and Appl.Chem.69. 1903-1910 (1997)

Tai,T.：“中枢神经系统中神经节苷脂抗原的细胞类型特异性表达”Pure and Appl.Chem.69。

Ozawa,H.: "Generation and characterization of mouse monoclonal antibodies specific for N-linked neutral oligosaccharides of glycoproteins." Arch.Biochem.Biophys.342. 48-57 (1997)

Ozawa,H.：“糖蛋白 N-连接中性寡糖特异性小鼠单克隆抗体的生成和表征。”