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大腸菌染色体複製とプラスミド複製の遺伝子による調節機構

大肠杆菌染色体复制和质粒复制的遗传调控机制

基本信息

批准号：
62615514
负责人：
永田俊夫
金额：
$ 1.02万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1987
资助国家：
日本
起止时间：
1987 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.大腸菌dnaA遺伝子産物はミニFプラスミドの複製に必須である.大腸菌dnaA遺伝子産物DnaAタンパク質は大腸菌の通常の複製起点oriCに結合し, 複製開始に必須の役割を演じることが知られている. 一方, ori-2を起点とするFプラスミドの複製開始の調節は, repE遺伝子産物タンパク質がori領域へ結合する働きによって実現される. 従来, Fプラスミドの複製には宿主大腸菌のdnaA遺伝子の働きは不必要と信じられてきた. しかし, ori-2を起点としてもつミニFプラスミドを用いて詳細な解析を行ったところ, その複製のためにはdnaA遺伝子作用が必要なことを見いだした. 殊に, ミニFpri-2にも存在するDnaAタンパク質結合シグナルのコンセンサス配列(DnaA box)が, 必須の役割を演じることが証明され, ミニFプラスミドの場合も, DnaAタンパク質のoriへの結合が複製開始の調節に関与する可能性を示唆した.2.大腸菌rnh変異株の細胞内でColElプラスミドが複製するメカニズムColElプラスミドの複製は, in vitroの実験結果から, 大腸菌ruh遺伝子産物のRNaseHによるプライマーRNA前駆体の切断によって開始することが知られている. しかし, in vivoの実験結果によれば, この酵素を欠損した. ruh^-変異株細胞のなかでもこのプラスミドは正常に複製する. このメカニズムを解明するために, プラスミドDNAの欠失変異株をシステマティックに構築して解析した. その結果, rnh^+株の細胞内で複製するためのメカニズムと, ruh^-株の細胞内で複製するためのメカニズムは, ある面で二律背反的に異なることが示された. しかし, プライマーRNA前駆体が独得の二次構造を保つことが要求される等の面においては, いずれにも必須のメカニズムが存在し, それはおそらくRNA-DNAハイブリッドの安定な形成のために要請されるものと考えられる.

1. E. coli dnaA gene products are required for replication. E. coli DNA A gene product DnaA protein binds to the normal origin of replication oriC of E. coli, and the necessary cleavage sequence is initiated at the start of replication. On the one hand, ori-2 is the starting point for the regulation of replication initiation, repE gene products are the starting point for the regulation of replication initiation. In the future, F. coli replication is not necessary for host E. coli. A detailed analysis of the function of the gene is necessary to determine the origin of the gene. In particular, the MiFpri-2 has a DnaA Tainpak material combined with a Siskel control system configuration.(DnaA box) For example, if the expression of DNA is necessary, the possibility of regulation of replication initiation by binding of DNA to DNA is demonstrated. 2. In vitro replication of E. coli rnh mutants, the expression of DNA is demonstrated. E. coli ruh gene product RNase H gene cleavage of RNA precursor start gene cleavage start gene cleavage. In vivo and in vivo, the enzyme was damaged. ruh ^-mutant cells are not allowed to replicate normally. The analysis of the DNA sequence of the mutant was carried out. As a result, the rnh ^+ strain replicates in the cell, ruh ^-strain replicates in the cell. The RNA precursor is unique to the secondary structure of the RNA precursor. The RNA precursor is unique to the secondary structure. The RNA precursor is unique to the secondary structure of the RNA precursor.