プラスミド複製開始蛋白mRNAの動的機能構造とアンチセンスRNAによる発現制御

质粒复制起始蛋白mRNA的动态功能结构及反义RNA的表达控制

• 批准号: 09278213
• 负责人: 伊藤 建夫
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Shinshu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09278213/
• 关键词: ColE2プラスミド; アンチセンスRNA; コピー数調節; 翻訳開始; 複製開始蛋白質; 高次構造; リホゾーム; RNA代謝

標的RNA(センスRNA)上の相補的な塩基配列に結合し、その機能発現を阻害するアンチセンスRNAの機能は、RNAの高次構造とその変化をともなうRNAの動的機能の一つに数えられよう.ColE2群プラスミドDNA複製系では,必須複製開始蛋白質(Rep)の発現が,そのmRNAに対するアンチセンスRNA(RNAI)により,転写後の段階で調節されている.本年度の成果:1)Rep蛋白質の翻訳開始に関与する上流配列と下流配列を同定するため,開始コドンの上流と下流の領域に新しい欠失変異や部位指定の塩基置換を導入することを試みたが,プラスミドの回収が極端に悪く,さらに予期せね挿入,欠失をもつものばかりで目的の変異を得ることができなかった.この領域が複雑な2次〜高次構造を形成するRNAをコードするためと考えられ,このようなDNA領域に簡便変異を導入する条件を確立すること重要である.2)ColE8においてrep-RNAI領域の遺伝子量を変化させた時のRep蛋白質発現量が遺伝子量に比例しており,RNAIによる調節の機能がcisの構造でも低下していること,Rep蛋白質mRNAとRNAIとの結合は正常に起こることが明らかとなった.このプラスミドにおいてRNAIによる調節に欠陥のある段階をかなり絞り込むことができた.3)Rep蛋白質の発現,RNAIの阻害活性に影響を与える宿主大腸菌因子の検索を試みた.他の系でアンチセンスRNAの作用に直接,間接の関与が証明あるいは推定されているRNaseE,ポリA合成(付加)酵素,ポリヌクレオチドホスホリラーゼの遺伝子に変異をもつ大腸菌へのColE2プラスミドの形質転換効率は野性型に比べてかなり低いが,保持菌中でのプラスミドDNA複製には特に異常は見られなかった.現在,プラスミドコピー数,Rep蛋白質発現量,Rep蛋白質mRNAとRNAIのレベルを調べている.

On the RNA, you can use the same base configuration combination, the machine can effectively prevent the operation of the RNA machine, and the RNA machine can cause the number of errors in the RNA movement. the ColE2 group must start the protein (Rep) to generate a copy of the DNA system. It is necessary to start the protein storage (Rep) test, and use the mRNA system to verify the RNA (RNAI) protocol. After writing the paragraph, I will tell you how to write it. The results of this year are as follows: 1) at the beginning of the Rep protein flip, the upstream configuration and the downstream configuration are the same, and in the field of the upstream and the downstream, the location of the new information is assigned to the user, and the customer is returned to the terminal, and the customer is scheduled to enter the terminal. I don't know if I don't want to know if I don't know if I don't know what to do. There are two copies in the rep-RNAI field, and there are two times in the RNA field. This is the first time that the Rep protein in the rep-RNAI field has been changed. 2) the proportion of the Rep protein in the rep-RNAI field has been significantly increased. The RNAI diagnostic machine can use cis to create a low level of stress. Rep protein, mRNA, and RNAI can be combined with a normal starting temperature to show signs of stress. The expression of Rep protein showed that the inhibitory activity of RNAI was similar to that of the host bacterial factor. He said that he had a direct effect on RNA, and that the rate of wild type was lower than that of wild type. It was presumed that the enzyme was synthesized (plus) enzyme, and that the rate of wild type was lower than that of wild type. Keep the bacteria in place of DNA replication in the bacteria. Now, the number of Rep protein, the amount of Rep protein, the amount of mRNA protein, the amount of protein, and the amount of protein, protein and protein.

项目成果

伊藤建夫(共著): "21世紀への遺伝学II 分子遺伝学(三浦謹一郎編)3.遺伝子複製のメカニズム" 吉野達治(裳華房), 276 (1997)

伊藤武夫（共同作者）：《21世纪的遗传学II分子遗传学》（三浦信一郎编辑）3.基因复制的机制》吉野达晴（Shokabo），276（1997）

Masaru Yagura: "Functional prganization of plasmid ColE2 initiator (Rep) protein and replication origin" Genes Genet.Syst.72. 382 (1997)

Masaru Yagura：“质粒 ColE2 启动子 (Rep) 蛋白和复制起点的功能组织”Genes Genet.Syst.72。