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コイの補体第3成分(C3)の単離

鲤鱼补体成分 3 (C3) 的分离

基本信息

批准号：
63560192
负责人：
矢野友紀
金额：
$ 1.02万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-63560192/
关键词：
補体補体成分 C3 コイ免疫生体防御魚類

项目摘要

哺乳類では、C3は補体の古典経路および第2経路に共通した成分であるのみならず、活性化によって食細胞の貪食を促進する作用のあるフラグメント(C3b)を生成するなど、生体防御に中心的役割を果たすことが知られている。本研究では、コイのC3を血清から単離し、その理化学的性質を調べた。コイのC3活性は、溶血中間複合体EAC14とヒドラジン処理コイ血清(Hd;C3とC4を欠く)からなる反応系に検体を加え、25℃で60分間溶血反応を行って測定した。なお、EAC14は5mMCa^<2+>と5mMTTHA(Mg^<2+>の選択的キレート剤)の存在下に、感作ヒツジ赤血球とコイ血清(200%溶血相当量)とを0℃で10分間反応させて調製した。また、Hdはコイ血清に1/(10)容のIMヒドラジン(pH7.5)を加え、25℃で30分間インキュベートして得た。C3の精製は、100mlのコイ血清をBlue-Cellulofine,QAE-Sephadex,SepharoseCL-6BおよびCM-Sephadexカラムクロマトグラフィーに順次かけて行った。精製C3の最終収率は17%で精製度は27倍であった。このC3は、SDS電気泳動および免疫電気泳的に均質であり、分子量はSepharose-CL-6Bを用いたゲル濾過法によって約19万と推定された。さらに、還元条件下でSDS電気泳動を行うと、分子量約12万のα鎖と約7万のβ鎖とに分かれ、両鎖とも過ヨウ素酸-シッフ試薬で染色され、糖を含むことが明らかとなった。精製C3は、コイ血清で処理したザイモサンからIMヒドラジン(pH7.5)で溶出されるタンパク質と同一の抗原性を示した。また、哺乳類で知られているC3の不活化剤でコイC3を処理したところ、コイC3は0.5Mヒドロキシルアミンや0.2Mメチルアミンによって容易に失活したが、2MKBrや0.5MKSCNによってはほとんど失活しなかった。今後はコイのB因子、D因子を単離すると共に、細菌の細胞膜によるC3の活性化メカニズムを解明したいと考えている。

Mammalian C3 complement classical pathway and the second pathway common components, such as the role of activation, the role of gluttony promotion, such as the role of C3b, the role of the biological defense center, such as the role of cutting fruit. In this study, the chemical properties of C3 in serum were investigated. The activity of C3 and hemolytic intermediate complex EAC14 were measured at 25℃ for 60 minutes. In the presence of 5mM Ca ^<2+> and 5mM THA (Mg^<2+>), EAC14 is sensitive to red blood cells and red blood serum (200% hemolytic equivalent). The temperature of Hd was 1/10 of that of IM (pH 7.5) and the temperature of 25℃ was 30 minutes. Blue-Cellulofine,QAE-Sephadex, Sepharose CL-6B, CM-Sephadex, 100ml, 100ml The final yield of refined C3 is 17% and the refined system is 27 times higher. The molecular weight of Sepharose CL-6B was estimated to be about 190,000 by filtration method. The molecular weight of SDS is about 120,000. The molecular weight of SDS is about 70,000. The molecular weight of SDS is about 120,000. Purified C3 was purified from the serum and showed its antigenicity by elution at pH 7.5. C3 is inactivated by 0.5M or 0.2M of C3, and is inactivated by 2MKBr or 0.5MKSCN. In the future, the activation of C3 in the cell membrane of bacteria will be investigated.