コイ補体のB因子およびC2のcDNAクローニング

鲤鱼补体B因子和C2因子的cDNA克隆

• 批准号: 07660271
• 负责人: 矢野 友紀
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07660271/
• 关键词: 魚類; コイ; 補体; B因子; C2; cDNA; RT-PCR; クローニング

哺乳類の補体系のC2とB因子は、それぞれ古典経路と第二経路を介して補体系の中心成分であるC3を活性化する重要な役割を担っている。本研究は、硬骨魚類のレベルで補体の古典経路と第二経路の分化を遺伝子レベルで検証することを目的として、コイのC2およびB因子のcDNA断片をRT-PCR法によって単離し、その配列を解析した。PCRプライマーには、両成分のセリンプロテアーゼドメイン内で保存されている2ケ所のアミノ酸配列をもとに合成した20merのオリゴヌクレオチドを用い、コイ肝膵臓から分離したmRNAを鋳型としてRT-PCRを行ったところ、250bpのDNA断片が特異的に増幅された。これをアガロースゲル電気泳動によって精製後、pGEM-Tベクターにサブクローニングして得られた15クローンの塩基配列をABI373Aシーケンサーで決定したところ、すべて同一の配列であった。また、この塩基配列から推定したアミノ酸配列は、マウスのC2およびB因子のアミノ酸配列とそれぞれ44%、42%と同程度の相同性を示した。マウスの肝臓mRNAからは、今回と同様の方法でC2とB因子をコードする2種類のcDNA配列が得られるのに対し、コイからは1種類の配列しか増幅されてこなかったこと、およびその配列が哺乳類のC2およびB因子に対して同程度の相同性を示したことは、硬骨魚類の補体系では、哺乳類とは異なり、C2とB因子の分岐は起こっておらず、両成分の機能を合わせ持つ1種類の成分しか存在しないことを示唆している。現在、本研究で得られたcDNA断片をプローブとして、cDNAの全長クローンの単離を進めているが、今後、この成分が実際にC2とB因子の機能を兼ね備えているかどうかをタンパク質レベルでも検証する必要があると考えられる。

Mammals の filling system の C2 と factor は B, そ れ ぞ れ classical 経 と second 経 road を interface し て filling system の center composition で あ る C3 を activeness す る cut を bear important な service っ て い る. This study は, bony fishes の レ ベ ル で complement の classical 経 と second 経 road の differentiation を but 伝 レ ベ ル で 検 card す る こ と を purpose と し て, コ イ の C2 お よ び factor B の cDNA fragment を rt-pcr method に よ っ て 単 し, そ の match column を parsing し た. PCR プ ラ イ マ ー に は, struck composition の セ リ ン プ ロ テ ア ー ゼ ド メ イ ン で stored in さ れ て い る 2 ケ の ア ミ ノ acid with column を も と に synthetic し た killing 20 の オ リ ゴ ヌ ク レ オ チ ド を い, コ イ routine liver Cui か ら separation し た mRNA を type where と し を line っ て RT - PCR た と こ ろ, 250 bp DNA fragment の Youdaoplaceholder0 special に increase された. こ れ を ア ガ ロ ー ス ゲ ル electric 気 swimming に よ っ て after refining, pGEM - T ベ ク タ ー に サ ブ ク ロ ー ニ ン グ し て have ら れ た 15 ク ロ ー ン の salt base with column を ABI373A シ ー ケ ン サ ー で decided し た と こ ろ, す べ て same の match column で あ っ た. ま た, こ の salt base with column か ら presumption し た ア ミ ノ acid with は, マ ウ ス の C2 お よ び factor B の ア ミ ノ acid with column と そ れ ぞ れ with degree of 44%, 42% と の identity を shown し た. マ ウ ス の perforatien mRNA in liver か ら は with others, today back to と の way で C2 と factor B を コ ー ド す る 2 kinds の cDNA match column が have ら れ る の に し, seaborne コ イ か ら は 1 species の match column し か rights of さ れ て こ な か っ た こ と, お よ び そ の match column が mammals の C2 お よ び factor B に し seaborne て gay を の phase and shown the same extent し た こ と は, Bony fishes の filling system で は, mammals と は different な り, C2 と B factor の branching は up こ っ て お ら ず, struck composition の function を わ せ hold つ 1 species の composition し か exist し な い こ と を in stopping し て い る. Now, this study で ら れ た cDNA fragment を プ ロ ー ブ と し て, cDNA の span ク ロ ー ン の 単 from を into め て い る が, in the future, こ の composition が be interstate に C2 と を の function and B factor ね prepared え て い る か ど う か を タ ン パ ク qualitative レ ベ ル で も 検 card す る necessary が あ る と exam え ら れ る.

项目成果

矢野 友紀: "水産動物の生体防御" 森勝義, 神谷久男 編, 129 (1995)

Yuki Yano：“水生动物的生物防御”Katsuyoshi Mori，Hisao Kamiya eds.，129（1995）

矢野 友紀: "生物生産と生体防御" 村上浩紀, 緒方靖哉, 松山宣明, 河原畑勇, 矢野友紀 編著, 349 (1995)

矢野由纪：“生物生产与生物防御” Hiroki Murakami、Yasuya Ogata、Nobuaki Matsuyama、Isamu Kawarabata、Yuki Yano（编辑），349（1995）

矢野 友紀: "魚類の補体" 魚病研究. 30. 151-158 (1995)

Yuki Yano：“鱼补”鱼病研究30。151-158（1995）。