コイ補体B因子の単離

鲤鱼补体因子B的分离

• 批准号: 03660196
• 负责人: 矢野 友紀
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03660196/
• 关键词: 魚類; コイ; 補体; B因子; complestatin; 補体成分; 免疫; 生体防御

著者らは先に、魚類の補体第2経路の活性が哺乳類と比較して著しく高いことを明かにし、魚類の生体防御(感染防御)における同経路の重要性を指摘した。本研究では、魚類の補体第2経路の活性化機構を解明するために、コイ血清からC3の活性化に関わるB因子の分離・精製を試み、以下の知見を得た。1.哺乳類のB因子の特異的不活化剤として知られるcomplestatinがコイの補体活性(溶血活性)に与える影響を調べたところ、古典経路は阻害されなかったが、第2経路は約15μg/mlの投与で著しく阻害された。このことは、コイ血清中に哺乳類のB因子に相当する補体成分が存在することを示している。そこで、complestatinで処理したコイ血清をB因子の検出試薬として用いることにした。2.コイ血清(100ml)をポリエチレングリコ-ル(PEG)分画し、10〜20%PEGで沈澱する画分を採取した。これを10mMリン酸緩衝液(pH7.5)に溶解し、DEAEートヨパ-ルカラムクロマトグラフィ-を行い、B因子画分約10ml(タンパク量約6mg)を得た。3.上記B因子画分のうち3mlを、セルロファインGCー700ーmカラム(1.4×78cm、限界排除分子量40万)に負荷し、ゲル濾過を行って分子量を測定したところ、コイB因子の分子量は約10万であることがわかった。4.今回分離したコイB因子は46℃、20分の熱処理で失活するなど、哺乳類のB因子と類似した性質を示したが、今後さらにポリペプチド鎖組成などを詳しく検討する予定である。

Author ら は に first, fish の complement 経 road 2 の active が mammals と compare し て the し く high い こ と を Ming か に し, fish の raw body defence (defense) infection に お け る importance with 経 road の を blame し た. This study で は, fish の complement の activeness 経 road 2 institutions を interpret す る た め に, コ イ serum か ら C3 の activeness に masato わ る factor B の separated, refined を try み, see the following の know を た. 1. Mammals の factor B の specific no activation と し て know ら れ る complestatin が コ イ の complement activity (hemolysis activity) に and え る influence を adjustable べ た と こ ろ, classical は 経 road resistance against さ れ な か っ た が, about 15 mu は 経 road 2 g/ml の cast with で し く resistance against さ れ た. こ の こ と は, コ イ に mammals の factor B in serum に quite す る complement components exist が す る こ と を shown し て い る. そ こ で, complestatin で 処 Richard し た コ イ serum を factor B の 検 out try 薬 と し て in い る こ と に し た. 2. コ イ serum (100 ml) を ポ リ エ チ レ ン グ リ コ - ル (PEG) draw し, 10 ~ 20% PEG で す serene manner る draw points を take し た. こ れ を 10 mm リ ン acid buffer (pH7.5) dissolve に し, DEAE ー ト ヨ パ - ル カ ラ ム ク ロ マ ト グ ラ フ ィ line - を い, B factor points about 10 ml (タ ン パ ク quantity about 6 mg) を た. 3. Written factor B draw points の う ち 3 ml を セ ル ロ フ ァ イ ン GC ー 700 ー m カ ラ ム (1.4 x 78 cm, margin ruled out molecular weight 400000) に load し, ゲ ル line filtration を っ て を molecular weight determination of し た と こ ろ, コ イ factor B の molecular weight about 100000 で は あ る こ と が わ か っ た. 4. Now back to separate し た コ イ factor B は 46 ℃ and 20 points の hot 処 lost で す live る な ど, mammals の factor B と similar し た nature を shown し た が, future さ ら に ポ リ ペ プ チ ド lock of な ど を detailed し く beg す 検 る designated で あ る.

项目成果

Hiroko Matsuyama: "Opsonic Effect of the Third Complement Component(C3)of Carp(Cyprinus carpio)on phagocytosis by Neutrophils" Fish and Shellfish Immunolgy. 2. 69-78 (1992)

Hiroko Matsuyama：“鲤鱼（Cyprinus carpio）第三补体成分（C3）对中性粒细胞吞噬作用的调理作用”鱼类和贝类免疫学。

Takeshi Uemura: "An Improved Method for the Preparation of EAC14,an Intermediate in Immune Hemolysis by Carp Complement" Journal of Faculty of Agriculture,Kyushu Univ.36. 273-278 (1992)

Takeshi Uemura：“鲤鱼补体免疫溶血中间体 EAC14 的制备改进方法”九州大学农学院学报第 36 期。

Takeshi Uemura: "Isolation of the Second Component of Complement(C2)from Carp Serum" Nippon Suisan Gakkaishi. 58. (1992)

Takeshi Uemura：“从鲤鱼血清中分离补体第二成分（C2）”Nippon Suisan Gakkaishi。

Hiroko Matsuyama: "Protective Effect of Schizophyllan and Scleroglucan against Streptococcus sp.Infection in Yellowtail(Seriola quinqueradiata)" Aquaculture. 10. 235-240 (1992)

Hiroko Matsuyama：“裂褶多糖和硬葡聚糖对黄尾鱼（Seriola quinqueradiata）中链球菌感染的保护作用”水产养殖。

Tomoki Yano: "Partial Purification and Characterization of Factor B of Carp Complement" Fish Pathology. 27. (1992)

Tomoki Yano：“鲤鱼补体 B 因子的部分纯化和表征”鱼类病理学。