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コイ補体第3成分の遺伝的多形解析

鲤鱼补体第三组分遗传多态性分析

基本信息

批准号：
08660252
负责人：
矢野友紀
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08660252/
关键词：
魚類コイ免疫学補体 C3 多形 cDNAクローニング RT-PCR

项目摘要

これまでに演者らはコイ補体C3のcDNAを3クローン単離したが、本研究ではRT-PCRを用いてこれら以外の変異C3を検索し、コイにおけるC3の多形性を検討した。C3のα鎖の中央付近に存在するチオールエステル部位のアミノ酸配列を基にセンスプライマー(P1)を合成した。一方、チオールエステル部位から約130および200アミノ酸残基C末端側に存在する、良く保存されたアミノ酸配列(VIAMQEAおよびWTVPGQH)を基にアンチセンスプライマー(P2,P3)を合成した。コイ肝膵臓cDNAライブラリーを鋳型としたPCRによってP1-P2間、P1-P3間を増幅し、塩基配列を決定した。プライマーの設計に用いたアミノ酸配列から予測されたように、P1-P2およびP1-P3を用いたPCRによってそれぞれ433bpと649bpのDNA断片が増幅された。両断片をpBluescriptII SK(-)ベクターにサブクローニングし、無作為に選んだ44クローンから制限酵素マッピングによって選別した32クローンの塩基配列を解析したところ、8種類の配列にグループ分けできた。最近、C3と同じくチオールエステルを持つ補体成分であるヒトC4を用いた解析によって、C4の1106番目のアミノ酸残基(His/Asp)が約100残基離れたチオールエステルの反応速度(すなわち異物に対する結合能)の高低を支配していることが判明したが(Dodds et al.,Nature,379,177-179,1996)、コイC3ではこの部位に相当するアミノ酸としてHis,Ser,Glnの3種が認められた。以上の結果から、コイには異物に対する結合能が異なる、少なくとも8種のC3が存在することが推測された。

This study was conducted to investigate the polymorphism of C3 in RT-PCR. C3 α-lock near the center of the existence of the base of the acid alignment of the base of the acid (P1) The C-terminal side of the acid residue is present in the first part, and the acid sequence (VIAMQEA and WTVPGQH) is well preserved. PCR amplification of the cDNA fragments between P1-P2 and P1-P3 was determined. The DNA fragment of 433 bp was amplified by PCR from P1-P2 and P3. Fragment pBluescriptII SK(-) Set up the list of the most important elements in the list of the most important elements. Recently, C3 and C4 have been identified to be dominant in the determination of complement components, and C4 has been identified to be dominated by 1106 residues of His/Asp, which are about 100 residues of His/Asp.(Dodds et al., Nature,379,177- 179, 1996), C3 and C3 are the three kinds of amino acids corresponding to His,Ser and Gln. The above results show that there are different binding energies and less binding energies in the C3.