家族性アミロイドニューロパチーのアミロイド線維蛋白一次構造の決定

家族性淀粉样神经病淀粉样原纤维蛋白一级结构的测定

基本信息

批准号：
63570364
负责人：
高橋光雄
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kinki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

我々が見い出した家族性アミロイドポリニューロパチーは、臨床的には日本に広く存在するType1(Andrade型)の病像に最も近いものであるが、皮膚が暗褐色調であること、末梢神経障害の程度が比較的に軽いこと、硝子体混#が高率にみられることなどの、特異性をもつ。我々は本家系のポリニューロパチー例におけるアミロイド蛋白のアミノ酸1次構造を明らかにすべく各種の解析を行った。剖検例から肝臓組織を得て、水抽出法によりアミロイド繊維を含む分画を得た。アミロ蓄積量は極めて低く、まずアミロイドrich画分を調整することが必要であった。生理食塩水による洗浄、酸処理、コラギナーゼ処理、庶糖密度勾配法によっても偏光顕微鏡下で確認し得たアミロイド繊維は全抽出物の1%以下であった。次に塩酸グアニジンを用いて可溶化し、分子ふるいクロマトグラフィー後、SDSPAGEでアミロイド蛋白を展開した。その結果、蛋白分子サイズは12K、40〜50Kダルトンに分布しており、HPLCカラムを用いた精製分離でも同様の結果であった。すなわちプレアルブミン分子サイズに該当する位置にバンドは存在しなかった。この水抽出物は可溶化する前に偏光顕微鏡下でコンゴーレッド陽性のアミロイド物質を確認していたことから、少くとも従来の水抽出法によるアミロイド分画法で得られるアミロイド繊維中にはプレアルブミンは存在するとしても、極めて少量であり、現時点ではアミロイド主要成分とは考えられない成績であった。血清プレアルブミンはDEAEカラム、アフィーブルーカラム、逆相HPLCで精製したのち、トリプシン処理を行った。このものをC_<18>逆相カラムにて分離したが、正常プレアルブミンのトリプシン消化パターンと明らかに異なるピークは検出されなかった。さらに分離したペプチドのアミノ酸1次構造を解析中である。

我们发现的家族性淀粉样蛋白多神经病是在日本广泛存在的1型（Andrade型）疾病图像的临床上最接近的，但具有深棕色皮肤，相对温和的周围神经病水平，并且玻璃体混合率很高。我们进行了各种分析，以阐明原始家族的多神经病实例中淀粉样蛋白的主要氨基酸结构。从尸检病例中获得肝组织，并通过抽水获得含有淀粉样蛋白纤维的分数。淀粉样蛋白的积累极低，有必要先调整淀粉样蛋白富含的分数。可以通过盐水，酸处理，胶原酶处理和糖密度梯度法洗涤可以在极化光显微镜下确认的淀粉样纤维不到总提取物的1％。接下来，使用盐酸鸟苷溶解该混合物，然后使用分子筛色谱法溶解，淀粉样蛋白通过SDSPAGE开发。结果，将蛋白质分子大小分布在12k和40-50k daltons，并使用HPLC柱进行纯化的分离获得了相同的结果。也就是说，在对应于pralbumin分子大小的位置上不存在任何条带。该水提取物在溶解之前证实了刚果红阳性淀粉样物质在极化光学显微镜下，因此，尽管使用常规水分提取的淀粉样蛋白分馏获得的淀粉样蛋白纤维中存在前蛋白质，但它的主要成分是毫无含量的，但这是不可思议的。通过DEAE柱，Affe Blue柱和相反的相HPLC纯化血清前蛋白，然后受到胰蛋白酶的影响。这是在C_ <18>相反的相柱上分开的，但是未检测到与正常前蛋白的胰蛋白酶消化模式明显不同的峰。此外，目前正在分析分离肽的主要氨基酸结构。