βアミロイド蛋白前駆体のベータセクレターゼ切断反応に対するカベオリン作用の検討

小窝蛋白对β-淀粉样蛋白前体β-分泌酶裂解反应的影响研究

基本信息

批准号：
12210158
负责人：
岡本卓
金额：
--
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12210158/
关键词：
アルツハイマー病アミロイド蛋白前駆体ラフト蛋白複合体

项目摘要

アルツハイマー病の病因遺伝子、アミロイド蛋白前駆体(APP)のマウス脳組織でのラフト局在を決定する目的で、界面活性剤に不溶性の分画をショ糖勾配法を用いた超遠心分離により、低密度分画(DIG分画)を回収する方法を確立した。この方法は、世界中で多くの研究者により使用されてきたが、再現性良く、DIGを採取することは脳組織に存在する多量のプロテアーゼの混入のため困難を極める。今回、我々は、種々の方法論の改良によりこれらの問題を克服した。そして、APPが有意にDIG分画に濃縮していることを発見した。このDIGのAPPの生化学的特徴を詳細に解析したところ、APPが450kDa前後の蛋白複合体を形成していることを見い出す事ができた。これまで、APPが蛋白複合体形成をしているという報告はなく、世界で始めての発見といえる。APPの一部を用いて、DIG分画中に存在している分子で、APPに結合しうる分子を求めたところ、150kDaのこれまでに報告のないAPPの結合分子を見い出すことができた。この分子は、グリセロール勾配法で、APPと全く同じ挙動を取る事が判明している。また、免疫沈降法により、この分子とAPPが、複合体をなすことも判明した。この分子は、APPを含む蛋白複合体の一部である可能性が高い。この分子が、APPの酵素切断反応にも影響を与える結果も得られている。今後、この分子のノックアウトマウスにおける、ベータアミロイドペプチド代謝への影響を検討する予定である。

为了确定小鼠脑组织中阿尔茨海默氏病，淀粉样蛋白蛋白前体（APP）的病原基因的筏定位，建立了一种通过使用蔗糖梯度方法来收集低密度分数（DIG级分）的方法。该方法已被世界各地的许多研究人员使用，但是由于脑组织中存在大量蛋白酶的污染，可再现和收集挖掘非常困难。现在，我们通过改善各种方法来克服这些问题。然后发现应用程序显着集中在挖掘部分。当对本挖掘中的APP的生化特性进行详细分析时，我们发现APP形成了约450 kDa的蛋白质复合物。迄今为止，还没有关于应用程序形成蛋白质复合物的报道，使其成为世界上的第一个发现。使用该应用程序的一部分，我们确定了可以从挖掘部分中存在的分子与应用结合的分子，并发现了APP的150 kDa以前未报告的结合分子。已经发现，使用甘油梯度方法，该分子的表现与应用程序完全相同。免疫沉淀还表明该分子和应用形成复合物。该分子可能是含有蛋白质复合物的一部分。该分子还对APP的酶裂解反应有影响。将来，我们计划研究该分子对敲除小鼠中β-淀粉样蛋白肽代谢的影响。