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^<18>O標識体を利用する組織中生理活性物質の超高感度分析

^<18>使用O标记物质对组织中的生理活性物质进行超灵敏分析

基本信息

批准号：
63571016
负责人：
後藤順一
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は、ガスクロマトグラフィー(GC)-マススピクトロメトリー(MS)の高分離能と負イオン検出法の高感度、高選択性に着目し、^<18>O標識体を利用する生理活性物質の超高感度測定法を確立し、病態の解析に資することを目的とした。まず、胆汁酸の負イオン検出GC-MS用誘導体化法に種々検討を加えた。その結果、カルボキシン基をペンタフルロベンジル(PFB)エステルに、水酸基をジメルエチルシリル(DMES)エーテルに導くとき、胆汁酸異性体の相互分離に優れるばかりか、負イオン検出MSにおいてPFB基の脱離したカルボキシレートアニオン [M-181] ~をきわめて強く生成し、これを利用する選択イオン検出法における感度が4attmoleにも達することを見出した。ついで内部標準物質として安定同位体標識胆汁酸の調整を行った。従来、本目的には^2H標識体が用いられているが、その調整には煩雑な操作が要求されるばかりか、標識純度の高いものが得にくい。そこでカルボニル酸素の交換反応を利用するステロイド核上水酸基への^<18>Oの定量的導入法を考案した。すなわち、遊離型、グリシンあるいはタウリン抱合型胆汁酸を対応するオキソ体に変換後カリウム塩に導き、H_2^<18>O中90℃、50時間加温した。ついで重水素化ホウ素ナトリウムで還元し [^<18>O-^2H] 二重標識胆汁酸を調製した。ひきつづき組織中胆汁酸の効果的なクリーン・アップ法に吟味を加え、負イオン検出GC-MSと逆同位体希釈法とを組み合わせた肝組織中胆汁酸の超微量分析法を確立した。本法は、感度、特異性に優れ、湿重量1mg以下の肝組織でも十分胆汁酸を測定することが可能であった。さらに本法が肝UDPグルクロニルトランスフェラーゼ活性の測定にもきわめて有用であることを明らかにした。

This study aims to establish a high sensitivity and selectivity method for the detection of physiologically active substances by high separation energy (GC)-MS, and to establish <18>a high sensitivity method for the detection of physiologically active substances by using O markers. GC-MS was used to detect the presence and absence of bile acids. Results: PFB (PFB), DMES (DMES), Bile Acid Heterogeneous Separation, MS (M-181), MS (The sensitivity of the method is 4attmole. Internal standard substances are used to identify bile acids. For this purpose, the 2H identification body is used in the process of adjustment, and the operation is required. The purity of the identification is high. A study on the quantitative introduction of amino acids in the nucleic acid by using the exchange reaction of amino <18>acids Free bile acids, free bile acids, and complex bile acids are also present in the medium at <18>90℃ for 50 minutes. [^<18>O-^2H] Double-labeled bile acid modulation A new method for the determination of bile acids in liver tissues was established. The method is sensitive, specific and feasible for the determination of bile acids in liver tissues with wet weights of less than 1mg. This method is useful for determining the activity of UDP.