ハイファネテッド・マススペクトロメトリ-による胆汁酸生合成機構の分析化学的研究

使用联用质谱法分析胆汁酸生物合成机制的化学研究

• 批准号: 02670974
• 负责人: 後藤 順一
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02670974/
• 关键词: 胆汁酸; 安定同位体; 選択イオン検出法; ^2H標識体; HPLC; GC; MS; β酸化; 生合成機構

本研究は、立体異性体の相互分離に有利な高速液体クロマトグラフィ-(HPLC)ならびにガスクロマトグラフィ-(GC)と、トレ-サ-法に必須のマススペクトロメトリ-(MS)とを組み合わせ、胆汁酸生合成における立体化学を明らかにすることを目的とした。まず、トレ-サとして用いる24位並びに25位に ^2Hを標識した3α,7α,12αーtrihydroxyー5βーcholestanー26ーoic acid(THCA)の調製を試みた。3α,7α,12αーTrihydroxyー5βーcholestー24ーenー26ーoic acid(△^<24>ーTHCA)をHPLCにて24E体および24Z体に分離後、前者をアゾジカルボン酸ナトリウム重酢酸を用いるジイミド(N_2 ^2H_2)還元に付した。ついで25位異性体をHPCLで分離し、目的とする(24R,25R)ー[24,25ー ^2H_2]および(24S,25S)ー[24,25ー ^2H_2]THCAを調製した。ひきつづき、ラット肝ペルオキシソ-ムのアシルCoAオキシダ-ゼによる脱水素反応の立体化学に検討を加えた。調製した ^2H標識25Rおよび25SーTHCAをそれぞれsucrose、ATP、CoAおよび硫酸マグネシウム存在下軽ミトコンドリアあるいはペルオキシソ-ム画分とインキュベ-トした。ついで胆汁酸を液・液抽出し、ペンタフルオロベンジルエステル-トリメチルシリルエ-テルに誘導後、負イオン検出GC/MS分析に付し、生成する△^<24>ーTHCA中の ^2Hの保持率を測定した。その結果、いずれもproー24Rの水素が脱離しており、25R体ではsynーelimiーnationで、一方、25S体ではantiーeliminationで24、25位水素の脱離の進行することが判明した。このように25位異性体間で脱離機構の異なることは興味深い。

This study は, three-dimensional straight body の separated に favorable な high-speed liquid ク ロ マ ト グ ラ フ ィ - (HPLC) な ら び に ガ ス ク ロ マ ト グ ラ フ ィ - (GC) と, ト レ に サ - method must の マ ス ス ペ ク ト ロ メ ト リ - (MS) と を group み close わ せ, bile acid biosynthesis に お け る stereochemistry を Ming ら か に す る こ と を purpose と し Youdaoplaceholder0. ま ず, ト レ - サ と し て in い る 24 and び に 25 に ^ 2 h を logo し た alpha 3, 7 alpha, 12 alpha ー trihydroxy ー 5 beta ー cholestan ー 26 ー oic acid (THCA) の modulation を try み た. 3 alpha, 7 alpha, 12 alpha ー Trihydroxy ー 5 beta ー cholest ー 24 ー en ー 26 ー oic acid (delta ^ < 24 > ー THCA) を HPLC に て 24 e body お よ び 24 に z body after the separation, the former を ア ゾ ジ カ ル ボ ン acid ナ ト リ ウ ム heavy を boggy acid to use い る ジ イ ミ ド (N_2 ^2H_2) repay に to た. つ い で 25 straight body を HPCL で separation し, purpose と す る (24 r, r) 25 ー [24, 25 ー ^ 2 h_2] お よ び (24, 25) s ー [24, 25 ー ^ 2 h_2] THCA を modulation し た. ひ き つ づ き, ラ ッ ト liver ペ ル オ キ シ ソ - ム の ア シ ル CoA オ キ シ ダ - ゼ に よ る dehydration, anti 応 の stereochemistry に を 検 please add え た. Modulation し た logo 25 r ^ 2 h お よ び 25 s ー THCA を そ れ ぞ れ sucrose, ATP, CoA お よ び sulfate マ グ ネ シ ウ ム presence 軽 ミ ト コ ン ド リ ア あ る い は ペ ル オ キ シ ソ - ム painting と イ ン キ ュ ベ - ト し た. つ い で bile acid を liquid, liquid extraction し, ペ ン タ フ ル オ ロ ベ ン ジ ル エ ス テ ル - ト リ メ チ ル シ リ ル エ - テ ル に after induction, negative イ オ ン 検 に pay し GC/MS analysis, generate す る delta ^ < 24 > ー THCA の in h ^ 2 の retention を determination し た. そ の results, い ず れ も pro ー 24 r の が water element from し て お り, 25 r で は syn ー elimi ー nation で, one party, 25 s body で は anti ー elimination で 24, 25 water element の from の す る こ と が.at し た. <s:1> ように ように25 opposite-sex individuals で detached from the mechanism <s:1> heterozygous なる と と were deeply interested in で.

项目成果

Takashi Iida: "Capillary Gasーliquid Chromatographic Behavior of Stereoisomeric Bile Acids with a Vicinalーglycol Structure by Their“Mixed"Alkylboronate Derivatives" J.Chromatogr.537. 345-356 (1991)

Takashi Iida：“具有邻二醇结构的立体异构胆汁酸的“混合”烷基硼酸酯衍生物的毛细管气相色谱行为”J.Chromatogr.537 (1991)。

Takashi Iida: "Potential Bile Acid Metabolites.XVIII.Synthesis of Stereoisomeric 3,6,12αーTrihydroxyー5βーcholanoic Acids" J.Lipid Res.

Takashi Iida：“潜在胆汁酸代谢物。XVIII.立体异构体3,6,12α－三羟基－5β－胆烷酸的合成”J.Lipid Res。

Junichi Goto: "Studies on Steroids CCLII.Separation and Characterization of 3ーOxo Bile Acids in Serum by HighーPerformance Liquid Chromatography with Fluorescence Detection" J.Chromatogr.

Junichi Goto：“类固醇 CCLII 的研究。通过带有荧光检测的高效液相色谱法分离和表征血清中的 3-氧代胆汁酸”J.Chromatogr。

Gang Shao: "Separation and Determination of Propranolol Enantiomers in plasma by HighーPerformance Liquid Chromatography with Fluorescence Detection" J.Liquid Chromatogr.

邵刚：“采用荧光检测的高效液相色谱法分离和测定血浆中的普萘洛尔对映体”J.Liquid Chromatogr。

Takashi Iida: "Potential Bile Acid Metabolites.17.Synthesis of 2βーHydroxylated Bile Acids" Steroids.

Takashi Iida：“潜在胆汁酸代谢物。17.2β-羟基胆汁酸的合成”类固醇。