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細胞融合による新種ル-メン細菌の育種と飼料消化の促進

新型瘤胃细菌的选育及通过细胞融合促进饲料消化

基本信息

批准号：
01560309
负责人：
大宮邦雄
金额：
$ 1.02万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1989
资助国家：
日本
起止时间：
1989 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は、細胞融合法や遺伝子導入法で家畜に定着する微生物の機能を改良することにより、家畜の飼料消化能を高め、家畜の生産効率を高揚せしめることを終局の目的としている。その手始めとしてRuminoeoccus albus Clostridium josui等のセルロ-ス分解菌やStaphylococcus warneri,Protaminoやbacter ruberあるいはEscherichia coli等の好気性菌を用いて電気パルス法による細胞融合やプラスミドの細胞内への導入を試みた。電気パルス法による細胞融合を行うためには、いわゆるパ-ルチエインを形成する必要がり、そのためにはまず親株の細胞をプロトプラスト化する必要があり、その条件設定をほゞ完了した。すなわち、対数増殖初期のR.albusやC.josuiの細胞にリゾチ-ムあるいはムタノリシンをNacl存在下で37℃、30分間保温することで90%以上の細胞をプロトプラスト化するのに成功している。一方、S.warneriやE.josuiのプロトプラスト化には、対数増殖期初期にペニシリンを添加してあらかじめ不完全な細胞壁を持つ細胞を捕集し、これにリゾチ-ム処理を行うとプロトプラスト化が可能になった。現在は、これらプロトプラスト化にかける電場の強さを検討し、融合条件の確立を急いでいる。また、エレクトロポレ-ションによるプラスミドの導入実験の結果、P.ruberへのプラスミド(pLA2917)の導入は、印加電圧:14KV/cm、パルス幅:100useeのパルスを10回課すことにより3×10^2の形質転換細胞数/ugDNAが得られた。以上、本研究補助金により購入した島津細胞融合装置SSH-2型により、細胞融合や遺伝子導入に関し、ほぼ初期の目的を達成することができた。

The aim of this study is to improve the function of microorganisms in livestock by cell fusion and gene introduction, and to increase the digestible energy and productivity of livestock. The cell fusion and intracellular transformation of Staphylococcus warneri,Protamino and bacter ruber, Escherichia coli, etc., were studied by electroporation method. The cell fusion of the electric field method is necessary for the formation of the cell fusion of the parent strain, and the condition setting is complete. In the presence of NaCl at 37℃ for 30 minutes, more than 90% of the cells in R.albus and C.josui at the early stage of proliferation were successfully transformed. A side, S.warneri and E.josui's top priority is to reduce the number of early growth period, increase the number of incomplete cell wall, maintain the number of cell capture, and reduce the number of possible cell processing. Now, the electric field intensity of the fusion process is discussed and the fusion conditions are established urgently. The results of the introduction of P. ruber (pLA2917) into the system were as follows: 1. Voltage:14KV/cm; 2. Amplitude:100usee; 3×10^2 cells/ugDNA. The Shimadzu Cell Fusion Device SSH-2 was purchased under this grant, and the initial goals of cell fusion and gene introduction were achieved.