多重遺伝子組換えイネによる土壌汚染特質の分解

多种转基因水稻对土壤污染特性的退化

• 批准号: 13027239
• 负责人: 大宮 邦雄
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Mie University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13027239/
• 关键词: イネ; 環境修復; クロロカテコール; Ralstonia eutrophus

環境汚染物質を土壌から分解除去し環境修復をすすめることは社会的に緊急の課題である。そこで微生物のもつ環境汚染物質分解能力を遺伝子組換え技術で導入した植物を育種し、これを汚染土壌に植えることにより、低コストで持続的な難分解性汚染物質の分解技術の開発を究極の目的とした。クロロカテコールはPCBなどを微生物的に分解するときの中間産物であり、PCB分解の律速となる。Ralstonia eutrophus NH9株がクロロカテコールを分解するステップのうち、律速となる芳香環開裂酵素クロロカテコールジオキシゲナーゼをコードする遺伝子cbnAを、イネで高発現させるEnhanced CaMV35Sプロモーター下流に連結し、バイナリーベクターpCAMBIA1300にのせ、アグロバクテリウムを用いてイネに導入した。PCR法で目的遺伝子の導入を確認後、イネカルスを用いてHPLC法でクロロカテコールが分解されクロロムコネートが生成することを確認した。カルスよりイネ植物体を誘導し、この種子より第二世代(T2)を生育させ、遺伝子の発現を抗CbnA抗体を作成してウエスタンブロッティング法で確認した。さらにクロロムコネートから塩素を除去するクロロムコネートシクロイソメラーゼをコードするcbnB遺伝子を、cbnA遺伝子とともに導入した。すなわち、cbnAおよびcbnB両遺伝子を上記のプロモーター下流に連結し、これをバイナリーベクターにのせ、アグロバクテリウム法でイネへ導入した。組換え植物体に両遺伝子が導入されていることをPCR法で確認後、HPLCでクロロムコネートが分解され、ムコネートが生成していることが確認できた。さらに、抗CbnB抗体でウエスタンブロッティングを行い、CbnBが発現していることが確認できた。

The decomposition and removal of environmental pollutants and the restoration of the environment are urgent issues for society.そこでのもつEnvironmental pollutant decomposition ability をRelics subunit replacement technology でIntroduction したPlant をbreeding し、これをContaminated soil The decomposition technology of refractory pollutants and the ultimate purpose of low-emission pollutants are developed.クロロカテコールはPCB などをThe intermediate product of microbial decomposition and であり, the rhythm of PCB decomposition. Ralstonia eutrophus NH9 strain がクロロカテコールを decomposition enzyme するステップのうち, rhythm speed となるaromatic ring cracking enzyme クロロカテコールジオキシゲナーゼをコードする缝子cbnAを、イネで高発行させるEnhanced CaMV35S プロモーター偫连し、バイナリーベクターpCA MBIA1300 にのせ、アグロバクテリウムを Use いてイネに to import した. After confirming the introduction of the PCR method, the HPLC method was used.クロロカテコールが decomposition されクロロムコネートが generate することをconfirmation した.カルスよりイネplant body をinduced し, このseed より second generation (T2) を fertility させ, legacy It is now known that the anti-CbnA antibody has been produced and the method of producing the anti-CbnA antibody has been confirmed.さらにクロロムコネーから塩素を出するクロロムコネーシシクロイソメラーゼをコードするcbnB伝子を、cbnA伝子とともに Import した.すなわち、cbnAおよびcbnB両伝子を上记のプロモーターIndecent Linkし. After the introduction of the plant body into the PCR method and confirmation, HPLCでクロロムコネートがDecompositionされ、ムコネートがGenerationしていることがConfirmationできた.さらに, anti-CbnB antibody でウエスタンブロッティングを行い, CbnB が発行していることがconfirmed できた.