レセプタ-抗体を用いた甲状腺ホルモン核レセプタ-の分析に関する研究

利用受体抗体分析甲状腺激素核受体的研究

• 批准号: 01570635
• 负责人: 中村 浩淑
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1989
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1989 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01570635/
• 关键词: 甲状腺ホルモン; レセプタ-抗体; c-erbA

癌原遺伝子c-erbAがT_3レセプタ-(NT_3R)をコ-ドしいることから、合成c-erbAペプチドをもとにNT_3Rを特異的に認識するポリクロ-ナル抗体を作成した。この抗体は、(1)臓器差、種族差なくNT_3Rを免疫沈降し、T_3とNT_3Rの結合を阻害し、(2)NT_3R以外のT_3結合蛋白とは反応せず、(3)c-erbAα_1及びβのin vitro転写翻訳産物を免疫沈降した。本抗体を用いてラット諸臓器のNT_3R蛋白の分布を、免疫組織染色法(蛍光抗体間接法)で検討し以下の成績を得た。(1)抗体によって特異的に染色されるNT_3R蛋白は、種々の臓器において細胞核に限局して存在した。(2)大脳皮質のニュ-ロン細胞、小脳の顆粒層神経細胞、下垂体前葉細胞、甲状腺瀘胞細胞で特に核の染色性が強陽性であった。一方肝、精巣、脾は核の染色度は弱かった。この結果は、ノザン分析で求められた各臓器のc-erbAα_1及びβ-mRNA量とほぼ平行すると考えられた。(3)NT_3R分布は臓器により一様ではなく、腎では糸球体、遠位尿細管細胞が、また精巣では精母細胞、精子頭部に限局して検出された。従ってこれらの臓器におけるT_3作用に関しては、更に細かい検討が必要である。ポリクロ-ナル抗体の作成に用いたc-erbAペプチドを使ってマウスに免疫し、モノクロ-ナル抗体の作成を行って、三種類のクロ-ンを確立した。またc-erbAα_1、α_2、βに特異的なペプチドを合成し、α_2に対し特異的なポリクロ-ナル抗体を、βに対するモノクロ-ナル抗体を作成出来た。α_1に対するモノクロ-ナル抗体は、現在クロ-ニング中である。以上よりc-erbAα_1+β共通抗体、β特異抗体、α_2特異抗体が得られたことになり、免疫組織化学的検討の他、ウエスタンブロッティング法、サンドイッチ法による定量的検討を開始している。

The production of anti-oncogene c-erbA antibodies to T_3 receptor (NT_3R) and NT_3R receptor was studied. These antibodies are: (1) immune deposition of NT_3R, inhibition of binding of T_3 to NT_3R,(2) reverse transcription of T_3 binding proteins other than NT_3R,(3) immune deposition of c-erbAα_1 and β in vitro. The antibody was used to detect the distribution of NT_3R protein in various organs, and the following results were obtained by immunohistochemical staining (indirect method of light antibody). (1)The NT_3R protein was detected by specific antibody staining, and its expression was restricted to the nucleus. (2)There were strong positive staining in large cortex neurons, small cortex neurons, pituitary anterior lobe cells and thyroid lymphocytes. The staining degree of liver, sperm and spleen nucleus is weak. The results showed that the expression of c-erbAα_1 and β-mRNA in all organs was significantly higher than that in the control group. (3)NT The distribution of_3R is limited to organ, kidney, distal urinary tubule, sperm cell and sperm head. It is necessary to study the effect of T_3 in the treatment of chronic diseases. The c-erbA selection for the production of anti-tumor antibodies is to establish the immune system, the production of anti-tumor antibodies, and the three types of anti-tumor antibodies. c-erbAα_1, α_2, β-specific antibodies were synthesized, α_2-specific antibodies were synthesized, β-specific antibodies were synthesized.α_1 is the most common type of antibody. c-erbAα_1+β common antibody, β specific antibody and α_2 specific antibody were obtained. Immunohistochemical analysis, quantitative analysis and quantitative analysis of c-erbA α_1 + β common antibody and β specific antibody were carried out.

项目成果

中村浩淑: "甲状腺疾患" 南江堂, 259-265 (1989)

Hiroyoshi Nakamura：“甲状腺疾病” Nankodo，259-265 (1989)

Tetsuya Tagami: "Characterization of interaction between nuclear T_3 receptors and antiserum against c-erbA peptide" Endocrinology.

Tetsuya Tagami：“核 T_3 受体与 c-erbA 肽抗血清之间相互作用的表征”内分泌学。

中村浩淑: "甲状腺ホルモンレセプタ-" Annual Review内分泌、代謝. 103-110 (1990)

Hiroyoshi Nakamura：“甲状腺激素受体-”年度评论内分泌学，代谢103-110（1990）。

Hirotoshi Nakamura: "Thyroid Research in Japan and China" Excerpta Medica, 21-25 (1989)

Hirotoshi Nakamura：“日本和中国的甲状腺研究”医学摘录，21-25（1989）

Hirotoshi Nakamura: "Recognition of rat liver and kidney nuclear T_3 receptors by an antibody against c-erbA peptide" Biochem Biophys Res Commun. 160. 148-153 (1989)

Hirotoshi Nakamura：“针对 c-erbA 肽的抗体对大鼠肝脏和肾脏核 T_3 受体的识别”Biochem Biophys Res Commun。