優位阻害型レチノイン酸受容体の肺特異的、時相特異的発現マウスの開発

具有显性抑制性视黄酸受体的肺特异性和时间特异性表达的小鼠的发育

• 批准号: 15659196
• 负责人: 中村 浩淑
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Hamamatsu University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15659196/
• 关键词: 肺癌; レチノイン酸受容体; レチノイン酸; 優位阻害作用; Cre-LoxP系発現ベクター; トランスジェニックマウス; サーファクタントC遺伝子

肺非小細胞癌ではレチノイン酸受容体(RAR)βの発現が低下し、これが癌化に関連する可能性がある。肺におけるレチノイン酸(RA)とその受容体の意義を明らかにすることが重要であるが、RA/RARは臓器発生に必須因子で、肺サーファクタント蛋白の産生にも関与するため、RARを破壊する単純なノックアウトマウスは致死的となる。そこで、正常RARに対し強力な阻害作用をもつ異常RARを、肺特異的かつ時相特異的にマウスに発現させる系の開発を試みた。正常RARに対し強い優位阻害作用を持つ異常RARα404XをCre-LoxP系発現ベクターに組み込み(pCALNL5-RAR404)、またtamoxifen(TAM)によりCre recombinase活性がオンとなる発現ベクターCre-ERTを、サーファクタントC遺伝子プロモーター下流に挿入した(SPC-Cre-ERt)。この系が正しく作動するかどうか確認するため、pCALNL5-RAR404とCre-ERTをCV1細胞に発現させた。TAM添加によりCre recombinaseが働き、Neo発現ユニットが切断されて異常RARα404が発現するのをウエスタンブロットで認め、細胞レベルで異常RARがたしかにコンディショナルに発現することを確認した。次いで、pCALNL5-RAR404遺伝子とSPC-Cre-ERt遺伝子を導入したトランスジェニックマウスを作成した。8匹のマウスが得られたので、TAMによって異常RARα404が実際に肺組織に産出されるか否かを、2匹にTAMを腹腔内投与して検討した。抗FLAG抗体を用いたウエスタンブロットで、正常対照とは異なるバンドが50KD付近に発現することを認めた。これまでの実験から、異常RARの肺特異的、時相特異的発現マウスの開発は、可能であろうと考えている。

Non-small cell lung cancer (NSCLC) is associated with a lower incidence of RAR beta. The significance of RA and RAR receptors is clear. RA/RAR receptors are essential factors in the production of RA and RAR receptors. RA receptors are essential factors in the production of RA and RAR receptors. For example, normal RAR may have a strong resistance to abnormal RAR, lung specific RAR, and phase specific RAR. Normal RAR corresponds to strong and moderate steric inhibition, abnormal RARα404X, Cre-LoxP system detection, Cre-ERT (pCALNL5-RAR404), tamoxifen(TAM), Cre-ERT (SPC-Cre-ERt), Cre-LoxP system detection, Cre-ERT (SPC-Cre-ERt). This is a positive action, pCALNL5-RAR404 and Cre-ERT CV1 cells. TAM added Cre recombinase to detect, Neo found, cut off, abnormal RARα404 to detect, cell cycle to detect, abnormal RAR to detect. PCALNL5-RAR404 is the first to be introduced into the SPC-Cre-ERt family. 8-pin TAM was injected intraperitoneally into the lung tissue. Anti-FLAG antibodies are used to detect the presence of anti-FLAG antibodies, normal anti-FLAG antibodies, and anti-FLAG antibodies. The occurrence of abnormal RAR is lung-specific and phase-specific.

项目成果

Inui N, Kitagawa K, Miwa S, Hattori T, Chida K, Nakamura H, Kitagawa M: "High expression of Cksl in human non-small cell lung carcinomas"Biochem Biophys Res Commun. 303(3). 978-984 (2003)

Inui N、Kitakawa K、Miwa S、Hattori T、Chida K、Nakamura H、Kitakawa M：“Cksl 在人类非小细胞肺癌中的高表达”Biochem Biophys Res Commun。

Yokomura K, Suda Y, Sasaki S, Inui N, Chida K, Nakamura H: "Increased expression of the 25-hydroxyvitamin D3-1 a -hydroxylase gene in alveolar macrophages of patients with lung cancer"J Clin Endcrinol Metab. 88. 5704-5709 (2003)

Yokomura K、Suda Y、Sasaki S、Inui N、Chida K、Nakamura H：“肺癌患者肺泡巨噬细胞中 25-羟基维生素 D3-1α-羟化酶基因的表达增加”J Clin Endcrinol Metab。

Inui N, Sasaki S, SudaT, Chida K, Nakamura H: "The loss of retinoic acid receptor α,β and alcohol dehydrogenase3 expression in non-small cell lung cancer"Respirology. 8. 302-309 (2003)

Inui N、Sasaki S、SudaT、Chida K、Nakamura H：“非小细胞肺癌肺中视黄酸受体 α、β 和乙醇脱氢酶 3 表达的丧失”呼吸学。 8. 302-309 (2003)

Nakano K, MatsushitaA, Sasaki S, Misawa H, Nishiyama K, KashiwabaraY, Nakamura H: "Thyroid hormone-dependent negative regulation of thyrotropin_eta gene by thyroid hormone receptors : STUDY WITH A NEW EXPERIMENTAL SYSTEM USING CV1 CELLS."Biochem J. 378. 5

Nakano K、MatsushitaA、Sasaki S、Misawa H、Nishiyama K、KashiwabaraY、Nakamura H：“甲状腺激素受体对促甲状腺素_eta 基因的甲状腺激素依赖性负调节：使用 CV1 细胞研究新的实验系统。”Biochem J. 378。

High expression of Cks1 in human non-small cell lung carcinomas

• DOI: 10.1016/s0006-291x(03)00469-8
• 发表时间: 2003-04-11
• 期刊: BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS
• 影响因子: 3.1
• 作者: Inui, N;Kitagawa, K;Kitagawa, M
• 通讯作者: Kitagawa, M