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甲状腺ホルモンレセプタ-の発現と機能に関する分子生物学ならびに免疫組織化学的研究

甲状腺激素受体表达和功能的分子生物学和免疫组织化学研究

基本信息

批准号：
03671144
负责人：
中村浩淑
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

A.甲状腺ホルモンレセプタ-(T)の発現に関する研究機能的TRを認識する抗TR抗体を用いウエスタンブロッティング法でTRα1(47kDa蛋白)およびTRβ1(54kDa)蛋白を同定した。ラット諸臓器のTR蛋白を測定するとα1,β1ともに肝に最も多く、以下大脳、腎、精巣の順であった。TRα1+β1ーmRNAは大脳に多く、肝には非常に少ないとされており、T3結合法から求められたTR量と相関しないことがこれまで問題になっている。ラット肝および大脳の核蛋白を高速液体クロマトグラフィ-で部分精製して得られたTR分画をウエスタンブロッティング分析とスキャッチャ-ド解析した所、大脳はTR蛋白量も最大T3結合容量も肝の約1/3であった。この結果1)肝と大脳においてTR一個当りのT3結合能は同一であること、2)肝には実際に機能的TR蛋白が大量に発現していること。3)TR蛋白量とT3結合容量は相関するが、mRNA量とは必ずしも相関せず、翻訳ないしそれ以降のステップにおいて未知の制御因子の関与が考えられること、が明らかとなった。B.甲状腺ホルモン不応症患者のTR遺伝子解析不応症患者の皮膚線維芽細胞からRNAを抽出し逆転写酵素でcDNAとした。TRβ1遺伝子に特異的なプライマ-を用いT3結合領域をPCRで増幅しその塩基配列を調べた所、1612番めの塩基にAーGの点突然変異があり、その結果438番めのリジンがグルタミン酸へ置換していた。この変異は家族内の3名の患者に共通しており、いずれもヘテロ接合体であった。変異遺伝子を用い家兎網状赤血球系でTRβ1蛋白を作成した所、この変異TRβ1は正常TRに比べT3結合親和性が1/10以下に低下していた。以上の結果、この患者において見出された点突然変異が不応症の原因となっていると結論付けられた。これは本疾患の異常TR遺伝子解析の本邦における最初の報告である。TR蛋白の細胞内局在、発現量に明かな異常は認められなかった。

A. Thyroid hormone receptor-(T) development related to the study of TR function recognition, anti-TR antibody using the same method TRα1(47kDa protein) and TRβ1(54kDa) protein identification The TR protein of all organs was determined. TRα1+β1 mRNA is large, liver is very small, T3 binding method is very small, TR quantity is very small, T3 binding method is very small. The maximum T3 binding capacity is about 1/3 of the total protein content of the protein. The results are as follows: 1) A large amount of TR protein is found in liver when T3 binding energy is the same; 2) TR protein with liver function is found in large amount. 3)TR protein quantity and T3 binding capacity are correlated, mRNA quantity is correlated, and the relationship between TR protein quantity and T3 binding capacity is unknown. B. TR gene analysis of thyroid cancer patients. RNA extraction and reverse transcription of cDNA in skin cells of patients with thyroid cancer. TRβ1 gene is specific to the T3 binding domain. PCR amplification increases the nucleotide alignment. The nucleotide alignment changes abruptly at 1612 points. As A result, 438 points of PCR amplification increase the nucleotide alignment. The three patients in the family shared the same disease. The binding affinity of TR β1 protein in reticulocytes was 1/10 lower than that of normal TR. The above results show that there are sudden changes in the symptoms and causes of the disease. The initial report on the analysis of abnormal TR genes in this disease. TR protein is present in cells and expressed in abnormal amounts.