有棘目動物の生産する細胞毒性活性成分の化学的研究

鳞状动物产生的细胞毒性活性成分的化学研究

• 批准号: 01571157
• 负责人: 古森 徹哉
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1989
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1989 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01571157/
• 关键词: 有棘目動物; オニヒトデ; ステロイドオリゴ配糖体サルフェ-ト; アルキルグリセロリン脂質; 細胞毒性; 溶血毒; 蛋白質; HPLC

沖縄県那覇近海で採集した有棘目動物オニヒトデの棘の凍結乾燥粉末について、魚毒活性を指標に溶媒分画、従来法による各種クロマトグラフィ-並びに購入設備を駆使して毒成分の精製を行い、メタノ-ルエキスより1種のステロイドオリゴ配糖体サルフェ-ト(20S-thorasterosideA)及び、2種のアルキルグリセロリン脂質(sn-1-0-hexadecylglycerol-3-phosphorylcholine,sn-1-0-octadecylglycerol-3-phosphoryl-choline)の単離同定に成功した。これら3種の化合物はいずれも強い溶血作用を有し、従来不明であったオニヒトデ棘の溶血毒はこれら3種の成分に起因することが判明した。次に、上述棘粉末の水エキスについて購入設備を駆使したゲル濾過によるクロマトグラフィ-を繰り返し、in vitroで細胞毒性を示す2種の蛋白質(Protein I 並びに Protein II)を得た。Protein Iは最終的にμBondasphereを使用したHPLCで精製した結果、分子量は約14650であり、アミノ酸分析により、Asp_<17>・Thr_<11>・Ser_8・Glu_<15>・Pro_5・Gly_<18>・Ala_9・Val_<12>・Met_2・Ile_7・Leu_6・Tyr_2・Phe_7・Lys_<14>・His_1・Arg_2の16種のアミノ酸組成を明らかにすることができた。また、N末端配列分析の結果、末端より25種のシ-クエンスが判明した。この結果をもとにGENASを用い、既知蛋白質との比較を行ったが、類似シ-クエンスを示す酢蛋白質は検索されず、新規蛋白質と考えられた。Protein Iはin vitroで選択的細胞毒性を示す結果を得ており、現在1次構造解析が進行中である。Protein IIについては、まだ、単離には至っていないが、SDS-PAGEで分子量約8万と推定され、マウスに対しては未精製ながらも強い致死作用を示すことから、Protein IIがオニヒトデ棘毒成分のマウスに対する致死毒の本体であることが推察された。

In addition, in the process of purification of toxic components, the preparation of freeze-dried powder of jujube, the determination of solvent, extraction method, and the purchase of equipment, the preparation of freeze-dried powder of jujube, the determination of fish toxicity index, the determination of solvent, extraction method, and the purchase of equipment, the preparation of freeze-dried powder of jujube, and the determination of fish toxicity index, the preparation of freeze-dried powder of jujube, and the determination of fish toxicity index, the preparation of freeze-dried powder of jujube, and the determination of fish toxicity index.(20S-thorasterosideA) and sn-1- 0-octadecylglycerol-3-phosphoryl-choline (sn-1 - 0-hexadecylglycerol-3-phosphoryl-choline) have been successfully identified. These three compounds have strong hemolytic activity, but their origin is unknown. In addition, two kinds of proteins (Protein I and Protein II) were obtained from the above mentioned jujube powder. Protein I was purified by HPLC using the final μBondasphere. Its molecular weight was about 14650. It was analyzed by acid analysis. Asp_<17>·Thr_<11>·Ser_8·Glu_<15>·Pro_5·Gly_<18>·Ala_9·Val_<12>·Met_2·Ile_7·Leu_6·Tyr_2·Phe_7·Lys_<14>·His_1·Arg_2. The results of N-terminal alignment analysis showed that there were 25 kinds of termini. The results of this study include the use of GENAS, the comparison of known proteins, the comparison of similar proteins, and the comparison of new proteins. Protein I is in vitro. Cytotoxicity of selected cells is shown. The first structural analysis is in progress. Protein II has a molecular weight of about 80,000 by SDS-PAGE, and its lethal effect is shown by SDS-PAGE. Protein II has a molecular weight of about 80,000.

项目成果

T.MIYAMOTO: "Biologically active glycoside from Asteroidea XXIII "Constituents of spines from the starfish Acanthaster planci"" Liebigs Ann.Chem.in preparation. (1990)

T.MIYAMOTO：“来自 Asteroidea XXIII 的生物活性糖苷“来自 Acanthaster planci 海星的刺的成分””Liebigs Ann.Chem. 准备中。