鎮痛活性ペプチド、キョ-トルフィンの中枢神経系における免疫組織化学的研究

中枢神经系统镇痛活性肽京都啡的免疫组织化学研究

• 批准号: 01571230
• 负责人: 塩見 浩人
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Fukuyama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1989
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1989 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01571230/
• 关键词: キョ-トルフィン; モノクロナ-ル抗体; 免疫組織化学; 神経ペプチド; 鎮痛作用

本研究において、キヨ-トルフィン(KTP)が神経伝達物質であることを証明するのに必要なKTP含有神経存在の有無を免疫組織化学的に検討した。1)KTP抗体の作製:KTPに対するポリクロナ-ル抗体の作製に成功した。コノ抗体の抗体価は1:13200(最終希釈率)で、ネオ・キヨ-トルフィン(Neo-KTP)に若干高い交叉応性(32.5%)を持っていたが他の類似ペプチドとの交叉応性は極めて低く、特異性の高いものであった。2)ラット脳を用いた免疫組織化学:免疫組織化学は直接蛍光方と間接蛍光方とによって検討した。免疫陽性細胞は延髄大縫線各、視床下部弓状各、尾状核被殻、梨状葉前皮質、傍巨大細胞網様核、台形体核に認められた。又、これらの免疫陽性細胞は、ニッスル染色によっても染色された。以上の結果は、中枢神経系においてKTP含有神経の存在を強く示唆するものである。しかしながら、本抗体はNeo-KTPに対しても反応性を持つため、Neo-KTPを認識している可能性も残っている。この点を解決するため、特異性のより高いモノクロナ-ル抗体の作製とその抗体を用いた免疫組織化学を計画した。3)抗KTP.モノクロナ-ル抗体による免疫組織化学:モノクロナ-ル抗体は免疫動物にBalb/Cマウスを用いた。常方に従い1gGクラスの抗体を産生するハイブリド-マを選びクロ-ニングし、マウス腹腔内に移植、腹水より得たlgG画分を精製した。本抗体を用いた免疫蛍光組織化学での検索に於いても、ポリクロナ-ル抗体を用いた時と同様の結果を得た。考察・結論:本研究において、特異性の高いKTP抗体を作製することに成功した。さらに、この抗体を用いて中枢神経系に於いてKTP含有神経の存在を組織化学的に初めて証明した。KTP含有神経の存在部位は、生理的疼痛制御機構を形成する脳部位に局在しており、KTPが中枢神経系の神経ペプチドとして、疼痛制御に深く関与していることを組織化学的に明らかにした。

In this study, the presence and absence of KTP as a neurotransmitter substance were investigated by immunohistochemistry. 1)KTP antibody production:KTP antibody production was successful. The antibody level of the antibody was 1:13200(final hope rate), and some high and middle cross-reactivity (32.5%) was maintained in the antibody level of Neo-KTP, while others were similar in cross-reactivity and low in specificity. 2) Immunohistochemistry: Immunohistochemistry: direct and indirect methods. Immunoreactive cells were found in the long suture lines, arcuate lines in the lower part of the optic bed, caudate nucleus capsule, pyriform leaf anterior cortex, paracellular reticular nucleus and platform nucleus. In addition, the immunopositive cells were stained with white dye. These results indicate that the central nervous system contains KTP, which strongly indicates the existence of KTP. This antibody is resistant to Neo-KTP and has the potential to recognize Neo-KTP. This is the first time that we've had a chance to find out how to make antibodies and how to use them in immunohistochemical programs. 3)Anti-KTP. Anti-KTP. Anti-KTP. The antibody is produced in the abdominal cavity, and the ascites is purified. Immunohistochemical detection of the antibody was performed in the same manner as in the case of the antibody. Conclusion: This study was successful in producing KTP antibody with high specificity. The presence of KTP in the central nervous system was initially demonstrated by histochemistry. KTP contains a central nervous system, a physiological pain control mechanism, and a histochemical mechanism.

项目成果

SHIOMI,Hirohito: "Monoclonal antibody directed against formcldehyde conjugated kyotorphin and immunocytochemical application in the rat brain." Brain Pesearch.

Shiomii，Hirohito：“针对甲醛缀合的京都啡肽的单克隆抗体及其在大鼠脑中的免疫细胞化学应用。”

田村豊: "ラット脳におけるKyotorphin含有神経存在部位の免疫組織化学的検索" 日本薬理学雑誌. 94. 34p (1989)

Yutaka Tamura：“免疫组织化学寻找大鼠大脑中含京都啡肽的神经的位置”日本药理学杂志 94. 34p (1989)。