がん細胞における染色体の不安定化と再配列に関与する分子遺伝学的研究

涉及癌细胞染色体不稳定和重排的分子遗传学研究

• 批准号: 02151064
• 负责人: 瀬野 捍二
• 金额: $ 9.6万
• 依托单位: National Institute of Genetics
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Cancer Research
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02151064/
• 关键词: 細胞周期; 温度感受性変異株; 染色体異常; チミジル酸ストレス; ユビキチン活性化酵素; トポイソメラ-ゼ; ヒストンH1キナ-ゼ; リン酸化

1.細胞周期G2期温度感受性変異株tsFT210はN末端から272番目のプロリンがセリンに変わったcdc2蛋白質をもつことを決定した。本変異cdc2キナ-ゼはM期に向かっての活性化が非許容温度(39.5℃)でみられず、本酵素の脱リン酸化もみられなかった。2.温度感受性変異株tsTM13は39.5℃で培養するとM期で細胞分裂を停止し、強く凝縮した染色体は終期に入っても脱凝縮せず、分裂装置の脱構築も起こらなかった。H1ヒストンのリン酸化及びcdc2活性は高く維持されつづけた。事実、チロシン脱リン酸化酵素の阻害剤バナジン酸処理はM期停止を解除した。3.DNA複製温度感受性変異株FS20を相補するヒトcDNAをクロ-ン化し、ユビキチン活性化酵素E1と決定した。染色体異常を高発する変異株tsTM3もE1の変異であった。E1遺伝子をヒトX染色体短腕上(Xp11.23)にマップした(放医研・高橋、堀との共同研究)。4.チミジル酸ストレスによって誘導されるエンドヌクレア-ゼをFdUrd処理FM3A細胞から分離精製した。本活性は2価重金属イオンを要求しない新しいタイプのものであった。5.相同組換えの開始反応である相同配列の認識と対合を担う鎖転移活性の精製をFM3A細胞よりすすめ、1)熱に不安定なMg^<2+>非依存性の活性と同依存性のものを分離した。2)後者は1.7kbにわたる鎖転移を行い方向は5'からであった。また、ミニサテライト配列に高い反応性を示した。6.DNAトポイソメラ-ゼIの阻害剤カンプトテシンはヒト細胞においてcーfos,TNFーα遺伝子の発現を誘導することを見いだした。阻害剤実験の結果は蛋白質キナ-ゼCの関与を示唆した。すなわち、カンプトテシンによるDNAートポI共有結合体形成がPKCを含む複数のリン酸化酵素を活性化すると推測された。

1. The temperature sensitive mutant FT210 in G2 of the cell cycle is determined by the N-terminal position of the cdc2 protein. The enzyme is activated at a temperature of 39.5℃ during the first phase of the reaction. 2. The temperature-sensitive mutant tsTM13 was cultured at 39.5℃, and the cell division was stopped, condensed, and the chromosome was defocused, and the fission apparatus was deconstructed. The activity of H1 and cdc2 was maintained at a high level. The inhibition of enzyme activity in the enzyme chain is released. 3. DNA replication temperature-sensitive mutant FS20 is complementary to cDNA and is determined by enzyme E1. Chromosome abnormalities are high in the mutant tsTM3 and E1. E1 gene is located on the short wrist of X chromosome (Xp11.23). 4. FM3A cells were isolated and purified by FdUrd treatment. The activity of heavy metals is required. 5. 1) Heat instability, Mg^<2+>-independent activity, and homo-dependent activity. 2)The latter is 1.7kb long and moves in the direction of 5'long. A high degree of anti-corruption is shown in the table below. 6. DNA detection and expression of TNF α gene in cells As a result of the inhibition, protein levels are related to protein levels. The formation of PKC and the activation of PKC in DNA consensus conjugates are speculated.

项目成果

Kaneda,S.et al.: "Structural and functional analysis of the human thymidylate synthase gene." J.Biol.Chem.26. 20277-20284 (1990)

Kaneda,S.et al.：“人类胸苷酸合酶基因的结构和功能分析。”

Mishina,Y.et al.: "Thymidylate stress induces homologous recombination activity in mammalian cells." Mutation Res.246. 215-220 (1991)

Mishina,Y.等人：“胸苷酸应激诱导哺乳动物细胞中的同源重组活性。”

Yasuda,H.et al.: "A point mutation in Cーterminal region of cdc2 kinase causes a G2ーphase arrest in a mouse temperatureーsensitive FM3A cell mutant." Cell Struct.Funct.16.

Yasuda, H. 等人：“cdc2 激酶 C 末端区域的点突变导致小鼠温度敏感 FM3A 细胞突变体的 G2 期停滞。”

Yamashita,K.et al.: "Okadaic acid,a potent inhibitor of type 1 and type 2A protein phosphatases,activates cdc2/H1 kinase and transiently induces a premature mitosisーlike state in BHK cells." EMBO J.9. 4331-4338 (1990)

Yamashita, K. 等人：“Okadaic 酸是 1 型和 2A 型蛋白磷酸酶的有效抑制剂，可激活 CDC2/H1 激酶并短暂诱导 BHK 细胞出现类似有丝分裂的状态。” 4338 (1990)

Tsuji,H.et al.: "Isolation of temperatureーsensitive CHOーK1 cell mutants exhibiting chromosomal instability and reduced DNA synthesis at nonpermissive temperature." Somat.Cell Mol.Genet.16. 461-476 (1990)

Tsuji, H. 等人：“在非允许温度下表现出染色体不稳定和 DNA 合成减少的温度敏感 CHO-K1 细胞突变体的分离。”161-476 (1990)。