Pー糖蛋白質の構造と機能の研究

P-糖蛋白结构与功能的研究

• 批准号: 02807028
• 负责人: 秋山 伸一
• 金额: $ 0.96万
• 依托单位: Kagoshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02807028/
• 关键词: Pー糖蛋白質; 多剤耐性; 薬剤結合部位; 副腎

1.ウシ副腎のPー糖蛋白質の機能の解析ウシ副腎のPー糖蛋白質の薬剤結合部位について解析するため、ウシ副腎から膜画分を分離し、[ ^3H]アジドピンでフォトアフィニティ-ラベルを行った。130KDaの分子がフォトラベルされ、この分子はPー糖給白質にする単クロ-ン抗体、Cー219で免疫沈降した。このことはウシ副腎のPー糖蛋白質が、アジドピンとの結合部位を有し、その分子量はヒト癌KB細胞のPー糖蛋白質より10KDa以上小さいことを示している。[ ^3H]アジドピンによるフォトラベルは、抗癌剤ビンブラスチンや耐性克服薬剤、レセルピン、ベラパミ-ルで阻害された。ウシ副腎Pー糖蛋白質は、ヒト癌KB細胞のPー糖蛋白質の薬剤結合部位とよく似た薬剤結合部位を持つことが判明した。2.ウシ副腎中より、Pー糖蛋白質の輸送基質となる物質の抽出について。ウシ副腎をホモジェナイズし、100%メタノ-ルで抽出した。これをヘキサンで分配し、ヘキサン層を除去したあと、酢酸エチルで分配し酢酸エチル層を濃縮乾固した。クロロホルムに溶解し、シリカゲルカラムに注入して1%酢酸、2%メタノ-ル、97%クロロホルムで溶出し、多剤耐性細胞への抗癌剤の蓄積を高める活性を各画分で測定した。活性部分を薄層クロマトグラフィ-で展開し、活性部分を採取して、順相HPLC、逆相HPLCにて精製を試みた。最後のODSー2カラムで、16分附近に活性のあるピ-クが認められたので、この物質の精製を進め、構造決定を行う予定である。

1. Functional analysis of P-glycoprotein in accessory kidney. Analysis of binding sites of P-glycoprotein in accessory kidney. Separation of P-glycoprotein from accessory kidney membrane. 130KDa molecules are linked to P-glycans, antibodies and C219 immune systems. The protein binding sites of the accessory kidney were found to have a molecular weight of more than 10KDa. [ ^3H] P-glycoprotein binding sites of accessory kidney and KB cells were identified. 2. It is necessary to extract substances from the transport matrix of P-glycoprotein in the kidney. It's a 100%-off solution. The distribution of acid is concentrated. The dissolution, dissolution, and accumulation of anticancer agents in multi-drug resistant cells were determined by injection of 1% acetic acid, 2% acetic acid, and 97% acetic acid. The active part was developed by TLC, analyzed by HPLC, purified by HPLC. Finally ODS-2

项目成果

Shinーichi Akiyama: "A molecular basis for multidrugーresistance and reversal of the resistance in Proceedings of the 8th Nikko Brain Tumor Conference" SpringerーVerlag,Tokyo,Inc., (1991)

Shin-ichi Akiyama：“第 8 届 Nikko 脑肿瘤会议论文集中多重耐药性和耐药性逆转的分子基础”Springer-Verlag，东京，Inc.，(1991)

Yasuo Kuwazuru: "Expression of the multidrug transporter,Pーglycoprotein,in acute leukemia cells and correlation to clinical drug resistance." Cancer. 66. 868-873 (1990)

Yasuo Kuwazuru：“急性白血病细胞中多药转运蛋白 P-糖蛋白的表达及其与临床耐药性的相关性。” 66. 868-873 (1990)。

Misako Ichikawa: "Modulators of the multidrug transporter,Pーglycoprotein,exist in the human plasma." Biochemical Biophysical Research Communication. 166. 74-80 (1990)

Misako Ichikawa：“多药转运蛋白 P-糖蛋白的调节剂存在于人血浆中。” 166. 74-80 (1990)

Yasuo Kuwazuru: "Expression of Pーglycoprotein in adult T cell leukemia cells." Blood. 76. 2065-2071 (1990)

Yasuo Kuwazuru：“成人 T 细胞白血病细胞中 P 糖蛋白的表达。”76。2065-2071 (1990)

Akihiko Yoshimura: "Purification and tissue distribution of human thymidine phosphorylase;high expression in lymphocytes,reticulocytes and tumors." Biochimica Biophysica Acta. 1034. 107-113 (1990)

Akihiko Yoshimura：“人胸苷磷酸化酶的纯化和组织分布；在淋巴细胞、网织红细胞和肿瘤中高表达。”