DNA増幅法(PCR法)による高多型VNTRマ-カ-の単離

通过DNA扩增法（PCR法）分离高度多态性的VNTR标记

• 批准号: 02807212
• 负责人: 時野 隆至
• 金额: $ 0.96万
• 依托单位: Japanese Foundation For Cancer Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1990
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1990 至 1991
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02807212/
• 关键词: RFLP; CAリピ-ト; ヒトゲノム; PCR法(DNA増幅法); RFLP(DNA多型性); 高多型性VNTRマ-カ-; ヒト・ゲノム

最近、多用されているミクロサテライトDNAの多型を効率よく同定する方法をテストした。ヒトゲノムコスミドライブラリ-に対してオリゴヌクレオチドCACACACACACACACACACAを用いてスクリ-ニングしたところ、約40%のクロ-ンが陽性であった。ミクロサテライト多型はくり返し配列の両側の配列を決定し、この配列からプライマ-を設計してPCR法(Polymerase Chain Reaction法)によりヒトゲノムDNAを増幅し、アクリルアミドゲル電気泳動によって長さに従ってDNAを分離することによって同定される。この際、最も労費を要するのはくり返し配列両側のDNAの配列を決定することである。そこでこのステップを簡便化するためにCAを10回くり返したオリゴヌクレオチドの3'側にA,GあるいはTを加えたもの、CC、CT、もしくはCGを加えたものの6種類のプライマ-をミックスしたものを直接コスミドのDNA配列を決定するプライマ-として用いた。この結果、約30%のクロ-ンがこれで直接配列を決定することが可能であった。3種類ずつにしたものでは約70%のクロ-ンがシ-クエンス可能であった。今後、この方法を利用してCAのくり返しによる多型を同定していくことが可能であると考える。

Recently, multi-purpose さ れ て い る ミ ク ロ サ テ ラ イ ト の DNA polymorphism を sharper rate よ く with fixed す る method を テ ス ト し た. ヒ ト ゲ ノ ム コ ス ミ ド ラ イ ブ ラ リ - に し seaborne て オ リ ゴ ヌ ク レ オ チ ド CACACACACACACACACACA を with い て ス ク リ - ニ ン グ し た と こ ろ, about 40% の ク ロ - ン が positive で あ っ た. ミ ク ロ サ テ ラ イ ト polymorphism は く り return し match column の struck side の column を decided し, こ の match column か ら プ ラ イ マ - を design し て PCR method (Polymerase Chain Reaction method) に よ り ヒ ト ゲ ノ ム DNA を raised し, ア ク リ ル ア ミ ド ゲ ル electric 気 swimming に よ っ て long さ に 従 っ て を DNA separation す る こ と に よ っ て with fixed さ れ る. The most labor-saving and labor-saving を should be determined by the matching of the DNA of the two sides of the を and the matching of the を to decide the する とである とである とである とである. そ こ で こ の ス テ ッ プ を easy す る た め に CA を 10 back く り return し た オ リ ゴ ヌ ク レ オ チ ド の 3 'side に A, G あ る い は T を plus え た も の, CC, CT, も し く は CG を plus え た も の の 6 kinds の プ ラ イ マ - を ミ ッ ク ス し た も の を directly コ ス ミ ド の DNA match column を decided す る プ ラ イ マ - と し Youdaoplaceholder0 uses て た. The <s:1> <s:1> results, approximately 30% of the <s:1> ロ ロ- が が れで れで れで れで is directly matched with を to determine that する とが とが とが is likely to であった. 3 kinds ず つ に し た も の で は about 70% の ク ロ - ン が シ - ク エ ン ス may で あ っ た. In the future, こ の way を using し て CA の く り return し に よ る polymorphism を with fixed し て い く こ と が may で あ る と え test る.

项目成果

Takashi Tokino: "Isolation and mapping of 62 new RFLP markers on human chromosome II." American Journal of Human Genetics. 48. 258-268 (1991)

Takashi Tokino：“人类 II 号染色体上 62 个新 RFLP 标记的分离和定位。”