RNA干渉技術を駆使してアポトーシス誘導シグナルを増強した遺伝子治療法の開発

开发利用RNA干扰技术增强细胞凋亡诱导信号的基因治疗方法

• 批准号: 21659323
• 负责人: 時野 隆至
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: Sapporo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21659323/
• 关键词: がん; 遺伝子治療; トランスレーショナルリサーチ; RNA干渉; p53; アポトーシス; 癌; 遺伝子; トランスレーションリサーチ

癌抑制遺伝子p53の導入による遺伝子治療が有効であると考えられるが、必ずしも著効するとは限らず、さらなる工夫が必要である。これまでに、我々はp21発現抑制miRNA/p53共発現アデノウイルスベクター(Ad-p53/miR-p21)を開発することで癌治療効果を増強することに成功した。そこで、更に別の標的遺伝子のひとつであるMDM2を特異的に発現抑制する人工miRNAの設計を行った。この設計配列を元に4種類のDNAオリゴを合成し発現プラスミドベクターに組み込んだ。このベクターをp53発現ベクターと共に大腸癌細胞HCT116にトランスフェクションしたところ、p53が強発現しているにもかかわらずMDM2の蛋白発現誘導の抑制が認められた。次に、相同組み換えを用いて、このベクターをアデノウイルスベクターAd-miR-MDM2を作成した。このアデノウイルスベクターをAd-p53/miR-p21と共に大腸癌細胞DLD-1に感染させたところ、MDM2の発現抑制によりp53の発現上昇と、それに伴うアポトーシスの増強効果が認められた。肝癌細胞Hep3Bおよび大腸癌細胞SW480にアドリアマイシンを併用した場合においても、miR-MDM2はAd-p53/miR-p21によるアポトーシス誘導を増強した。本研究において、p53発現ベクターにp21抑制miRNAおよびMDM2抑制miRNAベクターを併用することでアポトーシス増強効果を得ることに成功した。miRNA発現ベクターは、他のmiRNAをタンデムに接続することで複数の標的遺伝子の発現を抑制することが可能である。このため、他のアポトーシス阻害的な遺伝子に対するmiRNA設計し、複数を組み合わせることで相乗効果を得ることができる。この研究成果により、更なるp53遺伝子治療効果の増強および治療耐性の回避が期待できる。

Traces of cancer inhibition 伝 son p53 の import に よ る heritage 伝 son treatment が unseen で あ る と exam え ら れ る が shall ず し も the unseen す る と は limit ら ず, さ ら な る time が necessary で あ る. こ れ ま で に, I 々 は p21 発 now inhibition of miRNA/p53 発 now ア デ ノ ウ イ ル ス ベ ク タ ー (Ad - p53 / miR - p21) を open 発 す る こ と で cancer treatment services fruit を raised strong す る こ と に successful し た. そ こ で, more don't の に mark but 伝 の ひ と つ で あ る MDM2 を specific に 発 now inhibit す る artificial miRNA の line design を っ た. <s:1> <s:1> designed and arranged を elements に to synthesize four types of <s:1> DNA リゴを リゴを, resulting in プラス タ ドベ タ タ に に groups み込んだ. こ の ベ ク タ ー を p53 発 now ベ ク タ ー と altogether に HCT116 colorectal cancer cells に ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン し た と こ ろ, p53, strong が 発 now し て い る に も か か わ ら ず MDM2 protein の 発 induced の inhibit が now recognize め ら れ た. Time change に, same group み え を with い て, こ の ベ ク タ ー を ア デ ノ ウ イ ル ス ベ ク タ ー Ad - miR - MDM2 を made し た. こ の ア デ ノ ウ イ ル ス ベ ク タ ー を Ad - p53 / miR - p21 と に colorectal cancer cells DLD clutches - 1 に infection さ せ た と こ ろ, MDM2 の 発 now inhibit に よ り p53 の 発 now rising と, そ れ に with う ア ポ ト ー シ ス の raised strong working fruit が recognize め ら れ た. Hep3B HCC cells お よ び colorectal cancer cells SW480 に ア ド リ ア マ イ シ ン を and し た occasions に お い て も, miR - MDM2 は Ad - p53 / miR - p21 に よ る ア ポ ト ー シ ス induced を raised strong し た. This study に お い て, p53 発 now ベ ク タ ー に p21 inhibition of miRNA お よ び MDM2 inhibition of miRNA ベ ク タ ー を and す る こ と で ア ポ ト ー シ ス raised strong fruit comes unseen を る こ と に successful し た. Micrornas 発 now ベ ク タ ー は, he の micrornas を タ ン デ ム に meet 続 す る こ と で plural の mark heritage 伝 son の 発 now を inhibit す る こ と が may で あ る. こ の た め, he の ア ポ ト ー シ ス な of resistance to harm son 伝 に す seaborne る micrornas design し, plural を group み わ せ る こ と で phase 乗 fruit comes unseen を る こ と が で き る. The research results of <s:1> によ によ, the therapeutic effect of なるp53 remains 伝, <s:1> enhanced および treatment tolerance, <e:1> avoided が expectations, and で る る る.

项目成果

p53 Family Members Regulate the Expression of the Apolipoprotein D Gene*

• DOI: 10.1074/jbc.m807185200
• 发表时间: 2009-01
• 期刊: Journal of Biological Chemistry
• 影响因子: 4.8
• 作者: Y. Sasaki;H. Negishi;Ryota Koyama;Naoki Anbo;Kana Ohori;M. Idogawa;H. Mita;M. Toyota;K. Imai;Y. Shinomura;T. Tokino

A novel method, digital genome scanning detects KRAS gene amplification in gastric cancers: involvement of overexpressed wild-type KRAS in downstream signaling and cancer cell growth.

• DOI: 10.1186/1471-2407-9-198
• 发表时间: 2009-06-23
• 期刊: BMC cancer
• 影响因子: 3.8
• 作者: Mita H;Toyota M;Aoki F;Akashi H;Maruyama R;Sasaki Y;Suzuki H;Idogawa M;Kashima L;Yanagihara K;Fujita M;Hosokawa M;Kusano M;Sabau SV;Tatsumi H;Imai K;Shinomura Y;Tokino T
• 通讯作者: Tokino T

A novel biomarker for cervical cancer.

宫颈癌的新型生物标志物。

• 发表时间: 2009
• 期刊: Cancer Biology Therapy 8(12)
• 作者: Mita H;Toyota M;Aoki F;Akashi H;Maruyama R;Sasaki Y;Suzuki H;Idogawa M;Kashima L;Yanagihara K;Fujita M;Hosokawa M;Kusano M;Sabau SV;Tatsumi H;Imai K;Shinomura Y;Tokino T;Tokino T
• 通讯作者: Tokino T

A single adenovirus expressing p53 protein and p21-targeting artificial microRNAs improves therapeutic outcome in cancer.

表达 p53 蛋白和 p21 靶向人工 microRNA 的单一腺病毒可改善癌症的治疗效果。

• 发表时间: 2010
• 作者: Tokino;Takashi
• 通讯作者: Takashi

A Single Recombinant Adenovirus Expressing p53 and p21-targeting Artificial microRNAs Efficiently Induces Apoptosis in Human Cancer Cells

• DOI: 10.1158/1078-0432.ccr-08-2396
• 发表时间: 2009-06-01
• 期刊: CLINICAL CANCER RESEARCH
• 影响因子: 11.5
• 作者: Idogawa, Masashi;Sasaki, Yasushi;Tokino, Takashi
• 通讯作者: Tokino, Takashi