好中球の細胞膜表面上の遊走担当分子のcDNAクロ-ニング

负责中性粒细胞细胞膜表面迁移的分子的 cDNA 克隆

• 批准号: 03670337
• 负责人: 竹内 明輝
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Teikyo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03670337/
• 关键词: 好中球; 遊走能; モノクロ-ナル抗体TM316; cDNAクロ-ニング; 遺伝子解析

好中球の遊走能の機構を解明するために、KO^^¨hler & Milstein法に準じて、ヒト好中球の遊走能を特異的に抑制するモノクロ-ナル抗体TM316を作製した。この抗体が認識する抗原分子は約150kの膜蛋白であった。この分子を規定する核酸配列を明らかにするために、前述のモノクロ-ナル抗体を用いて、ヒト白血球由来のcNDAライブラリ-よりスクリ-ニングを行った。その結果、約400塩基対からなるcDNA断片のクロ-ニングに成功した。このcDNAクロ-ンから大腸菌蛋白発現ベクタ-pEX2ヘサブクロ-ニングし、部分的タンパク質を作製し、これをウサギに免疫して抗血清を得ることを試みた。現在のところ低力価ながらも、モノクロ-ナル抗体TM316が認識する好中球膜タンパク質と相同の分子量の分子と反応するポクロ-ナル抗体が得られた。より力価の高い抗血清を得、ヒト好中球の遊走活性を抑制することを確かめるために、cDNA断片より得られる部分的タンパク質を更にウサギに免疫中である。また。TM316が認識する膜タンパク質はヒト好中球に特異的に発現していることから、上述の実験と平行してヒト末梢血より好中球を分離し、ヒト好中球由来のcDNAライブラリ-を作製した。スクリ-ニングにはTM316およびヒト好中球膜表面上のTM316対応抗原を免疫して得たポリクロ-ナル抗体をプロ-ブとして用いた。その結果、数個の陽性クロ-ンを得た。これらのクロ-ンについては現在検討中である。

Good ball の wander can の institutions を interpret す る た め に, KO ^ ^ ¨ hler & Milstein method に quasi じ て, ヒ ト の wander in the good can be suppressed を specific に す る モ ノ ク ロ - ナ ル antibody TM316 を cropping し た. The <s:1> <s:1> antibody が recognizes the する antigen molecule が and the approximately 150k <s:1> membrane protein であった. こ の molecular を rules す る nucleic acid with column を Ming ら か に す る た め に, the foregoing の モ ノ ク ロ - ナ を ル antibody with い て, ヒ ト white blood cell origin の cNDA ラ イ ブ ラ リ - よ り ス ク リ - ニ ン グ を line っ た. Youdaoplaceholder0 そ result, approximately 400 base against らなるcDNA fragment <s:1> ロ ロ-ニ グに グに グに successful た た. こ の cDNA ク ロ - ン か ら coliform protein 発 now ベ ク タ - pEX2 ヘ サ ブ ク ロ - ニ ン グ し, part タ ン パ ク し, the qualitative を cropping こ れ を ウ サ ギ に immune し て antiserum を have る こ と を try み た. Now の と こ ろ low force 価 な が ら も, モ ノ ク ロ - ナ ル antibody TM316 が know す る good ball in membrane タ ン パ ク qualitative と の same molecular weight の molecular と anti 応 す る ポ ク ロ - ナ が ル antibodies to ら れ た. High よ り force 価 の い antiserum を, ヒ ト の wander in good inhibition す を る こ と を か indeed め る た め に, cDNA fragment よ り must ら れ る part of タ ン パ ク qualitative を more に ウ サ ギ に で in immune あ る. Youdaoplaceholder0. TM316 が know す る membrane タ ン パ ク qualitative は ヒ ト good ball に specific に 発 now し て い る こ と か ら, the above の be 験 と parallel し て ヒ よ ト peripheral blood separation in り good ball を し, ヒ ト origin of good の cDNA ラ イ ブ ラ リ - を cropping し た. ス ク リ - ニ ン グ に は TM316 お よ び ヒ ト membrane on the surface of good の TM316 応 seaborne を immune antigen し て must た ポ リ ク ロ - ナ ル antibody を プ ロ - ブ と し て in い た. Youdaoplaceholder0 <s:1> result, several <s:1> positive ロ ロ- を を た. Youdaoplaceholder5 れら れら ロ ロ- に に て て て て て である now 検 である である.