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好中球の細胞膜表面上の遊走および活性酸素産生担当分子の遺伝子学的解析

负责中性粒细胞细胞膜表面迁移和活性氧产生的分子的遗传分析

基本信息

批准号：
02670288
负责人：
竹内明輝
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Teikyo University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1990
资助国家：
日本
起止时间：
1990 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

マウス腹腔内に、ヒト顆粒球を注入した後、脾細胞を取り出し、腫瘍細胞と反応させ融合細胞を作製した。次いで、蛍光抗体法を用いて顆粒球に特異的な抗体を産生する細胞を選び出し、大量のモノクロ-ナルな抗ヒト顆粒球抗体を得た。その中から顆粒球の遊走能または、活性酸素産生能を抑制するモノクロ-ナル抗体(mAb)TM316、及びTM2を得た。TM316は顆粒球機能において遊走能のみを特異的に抑制する抗体で、3種類の遊走因子に対する遊走能を抗体濃度依存性に抑制し、各遊走因子に対する抑制において、同程度の抑制率を示した。しかし、TM316は顆粒球の自動能は抑制しなかった。このことからTM316は遊走能に関連する膜表面抗原を認識する抗体であることが示唆された。一方、TM2と名付けた抗体は、顆粒球の遊走能抑制に加え、活性酸素産生能を抑制した。これらの抗体と反応する膜表面抗原の精製は、不平衡pH勾配電気泳動(nonーequilibrium pH gradient electrophoresis. NEPHGE)法を用いた、2次元電気泳動や、CNBrーactivated sepharose 4BにmAbをコ-トしこれに、ヒト顆粒球膜成分を反応させることにより行った。得られた精製蛋白(TM316対応抗原)をウサギに繰り返し免疫し、ポリクロ-ナル抗体を得た。フロ-サイトメトリ-解析の結果このポリクロ-ナル抗体は、顆粒球と反応し、さらに、ヒト顆粒球の3種類の遊走因子に対する遊走能を抑制した。また顆粒球膜蛋白をニトロセルロ-ス膜に転写し、ウサギ抗血清をプロ-プとしたWestern Blottingにおいて、mAbTM316と同じ分子量の場所に発色を認めた。現在は、この抗原分子の超微量アミノ酸配列解析機によりアミノ酸配列を決定中である。一方、顆粒球のcDNAライブラリ-より、TM316と反応する抗原を規定している遺伝子のクロ-ニングをモノクロ-ナル抗体およびポリクロ-ナル抗体をプロ-プにして行った。その結果目的の遺伝子を有するクロ-ンを多数得た。現在各クロ-ンについて解析中である。またTM2対応抗原については現在精製中である。

After the pellets were injected into the abdominal cavity and injected into the abdominal cavity, the spleen cells were removed, and the fusion cells were made into the spleen cells. In the method of secondary antibody and light antibody, the antibody of granule was selected by the specific antibody of granule, and a large number of antibodies were obtained. In this study, the walking energy of granule, the activity of acid and the inhibition of antibody (mAb) TM316 and TM2 were detected. The TM316 granule machine can detect the inhibitory antibody of the walking energy test, the inhibitory antibody of the three kinds of walking factors, the degree-dependent inhibition of the antibody, the inhibition of each walking factor, and the inhibition rate of the same degree. The automatic action of TM316 particle ball can effectively restrain the production of iron and gas. We need to know the membrane surface antigen, the antibody, the TM316, the walking energy, the membrane surface antigen, the antibody, the walking energy, the membrane surface antigen. One side, the TM2 name pays the antibody, the granule ball can inhibit the addition, and the active acid can inhibit the growth of the antibody. The antibody antibody was used to detect the membrane surface antigen (MSA), the unbalanced pH was coupled with non electrophoresis equilibrium pH gradient electrophoresis. NEPHGE) method: two-dimensional swimming exercise, CNBr activated sepharose 4B mAb swimming exercise, particle membrane composition, particle membrane composition, and so on. Get protamine (TM316 antigen), antibody (antibody), immune (immune), antibody (antibody). The results of the analysis of the results showed that the walking factors such as antibody, anti-antibody, anti-antibody Granular membrane protein, antiserum, Western Blotting, mAbTM316, molecular weight, molecular weight. At present, the determination of trace amounts of antigenic molecules is in the process of determining the collocation of antigens. On the one hand, the particles were cDNA positive, and the TM316 antigens specified that the antigens were not specific, but the antibodies were not detected. The results showed that most of the children were successful. At present, we are in the process of analyzing the information. The TM2 antigen is now in the essence.