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コレステリルエステル転送蛋白の酵素免疫測定法の確立とその臨床応用

胆固醇酯转运蛋白酶联免疫分析方法的建立及临床应用

基本信息

批准号：
03557117
负责人：
松沢佑次
金额：
$ 6.98万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Developmental Scientific Research (B)
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至 1992
项目状态：
已结题

项目摘要

我々はヒト血漿を用いてコレステリルエステル転送蛋白(CETP)の精製を行った。精製CETPはSDS電気泳動上分子量約68,000の単一蛋白で合計約2mgのCETPを精製し得た。これをマウスに免疫し、免疫後に脾リンパ球細胞とマウスミエローマ細胞株を融合させハイブリドーマを作成した後、CETPに対するモノクローナル抗体産性細胞のクローン化を行った。この際のスクリーニングの手段として精製したCETPをプレートに固相化して培養上清中の抗体の存在を測定する固相法とβ-galactosidaseでラベルしたCETPを用いて培養上清と反応後のβ-galactosidase活性を追跡する我々独自の方法とを合わせて用いた。約200個のクローンをスクリーニングした結果、2個の強陽性を示すクローンが得られた。しかし、この陽性クローンをマウスの腹腔内に注入し、腹水抗体を上記の方法にて検討した結果、これらの両クローンの抗体価は必ずしも高くはなく、単クローン抗体として酵素免疫法に用いるには不適当と思われたため、現在再度マウスに免疫中である。また、CETPの静活部位として重要であるC末端側の合成ペプタイドを用いての免疫も試みている。この酵素免疫法の開発と並行して我々はCETP遺伝子異常の検討を行っている。すでにCETP遺伝子のイントロン14のsplice donor siteの1塩基変異(G→A)による高HDL血症症例を報告しているが、この遺伝子異常は健診受診者512名中5例に存在し、わが国の一般人口におけるこの遺伝子変異は約100人に1人と高率に存在することが明かとなった。さらに我々はエクソン15の中に新たなmissense変異(A→G)も発見した。これらのことはCETP蛋白測定の必要性を示すものである。また、このようなCETP遺伝子の異常はわが国においてのみしか発見されておらず、この酵素免疫法を確立することは各種高HDL血症の成因の診断に有用であると思われる。

I would like to know if you can send protein (CETP) to your mother by using the blood sample. The molecular weight of CETP-SDS electrophoresis was about 68000. The molecular weight of protein was estimated by 2mg-CETP. After immunization, the spleen cells were immunized, the cells were fused, the cells were fused, the cells were made, and the CETP antibodies were detected. To determine the presence of antibodies in the supernatant of solid-phase culture, the presence of antibodies in the supernatant of solid-phase culture, the presence of antibodies in the supernatant of solid-phase culture, the presence of antibodies in the supernatant of culture, the presence of antibodies in the supernatant of culture, the determination of antibodies in the supernatant, the determination of antibodies in the supernatant, the determination of antibodies in the supernatant, the determination of antibody in the supernatant of culture, the determination of antibody in the supernatant of culture, the determination of antibody in the supernatant of culture, the determination of antibody in the supernatant of culture, the determination of antibody in the supernatant of culture, the determination of antibody in the supernatant of culture, the About 200 customers failed to verify the results, and 2 strong ones showed that the results were successful. The abdominal cavity was injected into the abdominal cavity, the ascites antibody was injected into the abdominal cavity, the ascites antibody was injected into the abdominal cavity, the ascites antibody was injected into the abdominal cavity, the ascites antibody was injected into the abdominal cavity, the ascites antibody was injected into the abdominal cavity, the ascites antibody was injected into the abdominal cavity, the ascites antibody was injected into the abdominal cavity, the ascites antibody was injected into the abdominal cavity, and the ascites antibody was injected into the abdominal cavity. The resting and active parts of CETP were important. The C-terminal was used to synthesize the virus. Enzyme-linked immunosorbent assay (enzyme immunoassay) is used to carry out the clinical practice and to conduct regular CETP therapy in our hospital.