コレステロール逆転送系の動脈硬化防御機構に関する分子生物学的研究-脂質転送蛋白及び肝性リパーゼトランスジェニック動物を用いた解析-

高比重リポ蛋白(HDL)は動脈硬化防御作用を有し、動脈硬化巣からコレステロールを汲み出し、肝臓へ運んで処理するコレステロール逆転送系の主役である。我々はHDLから他のリポ蛋白へとコレステロールエステルを転送する脂質転送蛋白(CETP)や肝性リパーゼ(HTGL)の欠損に起因する高HDL血症を発見し、その遺伝子異常の解析やリポ蛋白代謝異常の検討を行なってきた。本年度の研究では、CETP欠損症の遺伝子解折をさらに推し進め、新しいミスセンス変異を発見し、本変異が本邦では高頻度に存在することも確認した。さらに、CETPの生理的意義を解明するため、CETP活性を欠損するラットに精製した高濃度のCETPを静注し、そのリポ蛋白の変動を観察した。その結果、LDLはコレステロールに冨み、HDLはコレステロールに乏しくなり、HDLの粒子経も縮小し、リポ蛋白のremodellingにCETPが重要であることを示唆するデータを得た。さらに、ラットにLipofection法によるヒトCETP遺伝子の導入を試み、そのリポ蛋白代謝に及ぼす影響を検討した。本法はSendai virusの持つ細胞融合能と核蛋白HMG1の核への移行性を利用する方法で、効率良く遺伝子発現が可能な方法である。CETP遺伝子は経門脈的に導入し、血中CETP活性の上昇を確認すべく、活性測定を行なったが、軽度の上昇に留まり、また血清リポ蛋白の変動も軽微であった。この原因として発現ベクターの不適合が考えられ、現在新しいベクターを用いて詳細に検討中である。また、HTGL遺伝子のLipofectionによる導入については、HTGLを欠損するウサギに投与すべく、現在minigeneを作製中で、詳細に検討の予定である。

高比重リポ蛋白(HDL)は動脈硬化防御作用を有し、動脈硬化巣からコレステロールを汲み出し、肝臓へ運んで処理するコレステロール逆転送系の主役である。我々はHDLから他のリポ蛋白へとコレステロールエステルを転送する脂質転送蛋白(CETP)や肝性リパーゼ(HTGL)の欠損に起因する高HDL血症を発見し、その遺伝子異常の解析やリポ蛋白代謝異常の検討を行なってきた。本年度の研究では、CETP欠損症の遺伝子解折をさらに推し進め、新しいミスセンス変異を発見し、本変異が本邦では高頻度に存在することも確認した。さらに、CETPの生理的意義を解明するため、CETP活性を欠損するラットに精製した高濃度のCETPを静注し、そのリポ蛋白の変動を観察した。その結果、LDLはコレステロールに冨み、HDLはコレステロールに乏しくなり、HDLの粒子経も縮小し、リポ蛋白のremodellingにCETPが重要であることを示唆するデータを得た。さらに、ラットにLipofection法によるヒトCETP遺伝子の導入を試み、そのリポ蛋白代謝に及ぼす影響を検討した。本法はSendai virusの持つ細胞融合能と核蛋白HMG1の核への移行性を利用する方法で、効率良く遺伝子発現が可能な方法である。CETP遺伝子は経門脈的に導入し、血中CETP活性の上昇を確認すべく、活性測定を行なったが、軽度の上昇に留まり、また血清リポ蛋白の変動も軽微であった。この原因として発現ベクターの不適合が考えられ、現在新しいベクターを用いて詳細に検討中である。また、HTGL遺伝子のLipofectionによる導入については、HTGLを欠損するウサギに投与すべく、現在minigeneを作製中で、詳細に検討の予定である。