耐塩性緑藻ドナリエラの蛋白質リン酸化による浸透圧調節

耐盐绿藻杜氏藻中蛋白质磷酸化对渗透压的调节

• 批准号: 03640565
• 负责人: 鳥山 尚志
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03640565/
• 关键词: Dunaliella; Ca^<2+>ー依存性プロテインキナ-ゼ; 蛋白質リン酸化; 浸透圧調節

1)Dunaliella tertiolecta細胞破砕液の可溶性画分から硫安塩析、DEAEーToyopearl、PhenylーSepharoseおよびHydroxylapatiteカラムクロマトグラフィ-によりCa^<2+>依存性プロテインキナ-ゼ(CDPK)を900倍に精製し、酵素学的な諸性質を検討した。CDPKはμM付近のCa^<2+>により活性化され、その活性化にカルモデュリンやリン脂質を必要としなかった。CDPKはカゼイン、ミオシン軽鎖やヒストンIIIーSをリン酸化した。CDPKのカゼインおよびATPに対する見かけのK_m値はそれぞれ300μg/mlおよび11μMであった。CDPKの活性はカルモデュリン阻害剤であるcal midazolium、trifluoperadineやcompound48/80により阻害された。CDPKはCa^<2+>依存的に可逆的に疎水性が増大し、またDunaliella細胞から調製された膜画分に、μM付近のCa^<2+>存在下で移行し、EGTAにより遊離した。このことからCDPKがCa^<2+>依存的なトランスロケ-ションを行なうことが示唆された。CDPKはDunaliella細胞の膜画分のタンパク質を顕著にリン酸化したが、可溶性画分のタンパク質はほとんどリン酸化しなかった。2)細胞内情報伝達に作用する一連の阻害剤を培地に添加し、Dunaliella細胞の浸透圧調節への影響を検討した。プロテインキナ-ゼ阻害剤であるK252aは低浸透圧ショック下で細胞の形状回復を阻害し、プロテインホスファタ-ゼ阻害剤のカリクリンAは高浸透圧ショック下での収縮した細胞の容積回復を阻害した。細胞内Ca^<2+>をTMBー8等によりキレ-トした場合に細胞が徐々に膨潤し、容積調節に影響が生じた。3) ^<32>Pリン酸を培地に添加してDunaliella細胞のin vivoラベルを行った。細胞に高/低浸透圧ショックを負荷し、細胞全タンパク質をSDSーPAGEを行いリン酸化タンパク質を検索した。その結果、浸透圧の負荷に伴い特異的にリン酸/脱リン酸化されるバンドが観察された。

1)Dunaliella tertiolecta cell lysis solution soluble draw analysis, DEAE-Toyopearl, Phenyl-Sepharose, Hydroxyl apatiteカラムクロマトグラフィ-によりCa^<2+>dependencyプロテインキナ-ゼ(CDPK) is 900 times refined and has various enzymatic properties. CDPK is required for the activation of Ca^<2+> and the activation of CDPK by にカモデュリンやリンlipid. CDPK はカゼイン, ミオシン軽 lock やヒストンIIIーSをリン acidified した. CDPKのカゼインおよびATPに対する见かけのK_m値はそれぞれ300μg/mlおよび11μMであった. CDPK's active ingredients include calamine midazolium and trifluoperadine compound 48/80 ingredients. CDPK depends on Ca^<2+> and is reversible and aqueous. It increases the size, modulates the membrane of Dunaliella cells and divides the membrane. It migrates in the presence of μM near Ca^<2+>. EGTA is free.このことからCDPKがCa^<2+>depends on the なトランスロケ-ションを行なうことが时憆された. CDPK is a membrane-specific component of Dunaliella cells. Acidified acid, soluble drawing points of acidified acid. 2) The role of intracellular intelligence is the addition of inhibitory agents and the addition of soil, and the regulation of osmotic pressure in Dunaliella cells has an impact.プロテインキナ-K252a low permeability pressure ショック lower cell shape recovery をHinder し, プロテインホスファタ-ゼHISHIFTING のカリクリンAはHIGH Saturation Pressure ショック下でのShrinkしたThe volume recovery of the cells is blockedした. Intracellular Ca^<2+> and TMB8 etc. can affect cell swelling and volume regulation in various situations. 3) ^<32>Purino acid is added to Dunaliella cells in vivo. Cell high/low permeability pressure test, cell full-spectrum SDS PAGE acidification test. The result of the test is the specific にリン acid/de-リン acidification されるバンドが観看された.

项目成果

Takashi Yuasa and Shosi Muto: "Ca^<2+>ーdependent protein kinase from the halotolerant green alga Dunaliella tertiolecta:Partial purification and Ca^<2+>ーdependend association of the enzyme to the microsomes" Arch.Biochem.Biophys.

Takashi Yuasa 和 Shosi Muto：“来自耐盐绿藻 Dunaliella tertiolecta 的 Ca ^ 2+ 依赖性蛋白激酶：酶与微粒体的部分纯化和 Ca ^ 2+ 依赖性关联”Arch.Biochem.Biophys。