植物ユビキチンの生理生化学的研究

植物泛素的生理生化研究

• 批准号: 63540527
• 负责人: 鳥山 尚志
• 金额: --
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1988
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1988 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-63540527/
• 关键词: ユビキチン; ユビキチン化蛋白質; 抗ユビキチン抗体; クラミドモナス

1.環境条件によるユビキチン(Ub)化蛋白質の変動一抗Ub抗体を用いたウエスタンブロット法により、クラミドモナスにUb及びUb化蛋白質を検出できた。Ub化蛋白質のうち主なものは分子量31KDと28KDの2種であった。これらは、40℃以上の熱、メチルビオローゲン存在下での光照射、アミノ酸アナログの添加などのストレスによって相互に関連しながら特徴的な変動を示した。また、細胞周期や配偶子の接合の過程でも特徴ある変化をすることが示されるなど、これらのUb化蛋白質が細胞の生理状態と密接に関連していることが強く示唆された。2.In Vitroでの蛋白質Ub化活性-クラミドモナス細胞破砕液の超遠心上清に、^<125>Iで標識した。精製ヒトUbを加えて蛋白質のUb化を電気泳動によって解析した。いくつかの蛋白質は、ATP存在下でUb化された。これらのUb蛋白質の中には上に述べた28および31KDも含まれていた。これにより、クラミドモナスにも実際にATP依存の蛋白質Ub化の系が存在することが明らかとなった。3.Ub化ヒストンについて-ウシ脳線のヒストンH2AおよびH2Bに対する抗体をウサギで作製した。この抗体を用いてクラミドモナスにUb化ヒストン(uH2AおよびuH2B)が存在するか否かをウエスタンブロット法により検索した。28および31KDの位置にこれらの抗体と反応するバンドはみられず、このことから、これら2つがいわゆるUb化ヒストンではないことが結論された。4.28KDUb化蛋白質の精製-等電点電気泳動により解析したところモナスより核を単離し抗Ub抗体でウエスタンブロットを行ったところ、28KDは、明らかにこのオルガネラに濃縮されていた。現在、単離核を出発材料に28KDの精製を試みている。

1. The environmental conditions are sensitive to the environmental conditions. The anti-Ub antibody is activated by the environmental conditions. The anti-Ub antibody is detected by the enzyme-linked immunosorbent assay (Ub) and Ubized protein assay (UBG). The molecular weight of Ub protein was determined by the molecular weight of 31KD 28KD. The temperature is above 40 ℃, the temperature is above 40 ℃, the temperature is low, the temperature is high, the temperature is above 40 ℃, the temperature is above 40 ℃. In the process of conjugation, the cell cycle ligand conjugation process is very important in the process of ligand conjugation. in the process of conjugation, the process of conjugation is very important in the process of conjugation. in the process of conjugation, the process of conjugation. 2.In Vitro protein Ub activity-cell breakage fluid supernatant, ^ & lt;125>I marker. Fine Ub, protein, Ub, electrophoresis, electrophoretic analysis, electrophoretic analysis. In the presence of protein protein and ATP, there is no significant difference between the two groups. In the Ub protein section, there is a description in the above section that "28"31KD" contains a small amount of DNA. Please tell me that there is a problem in the Ub system of international ATP dependent proteins. 3.Ub is used to detect antibodies against H2A, H2B, and other antibodies. There is a uH2A antibody (uH2A antibody uH2B) in which there is an antibody antibody. 28

项目成果

K.Shimogawara;S.Muto: Plant and Cell Physiology. 30. 9-16 (1989)

K.Shimokawara；S.Muto：植物和细胞生理学。