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脂質性2次メッセンジャー代謝酵素に関する生化学的,遺伝子工学的検討

脂质第二信使代谢酶的生化和基因工程研究

基本信息

批准号：
05152101
负责人：
加納英雄
金额：
$ 1.98万
依托单位：
Sapporo Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ジアシルグロセロール(DG)をホスファチジン酸に変換するDGキナーゼ(DGK)について、分子生物学的検討を行なった。DGKの逆向きの反応を触媒するPAホスファターゼについても、酵素精製に成功後(加納等、JBC,-92)、cDNAクローニング中である。最初にクローン化されたDGKアイソザイム(alpha型)は、ラット脳ではオリゴデンドログリア細胞に限局して発現しており、生後7週で発現最大となり、発育分化による転写調節を受けている(後藤ら、Mol.Brain Res.,-92)。DSKalpha遺伝子の転写調節機序を理解する目的でヒト染色体遺伝子をクローン化した(藤川等、BJ,-93)。この遺伝子は意外にもハウスキーピング遺伝子の特徴を持ち、5′フランキング部位には基本的なプローモーター活性が検出された。しかし本酵素の細胞特異的な発現機序の解明のために、さらに検討する必要がある。多数のDGKアイソザイムの存在が示唆されてきたが(加納等、Cell.Signal.,-93)、第3番目のヒトDGKgammaのcDNAクローニングを行なった(甲斐等、投稿中)。このアイソザイムはヒト網膜に特徴的に強く発現しているが、ほかの細胞、組織での発現は極めて少ない。さらに、脳と網膜以外の細胞、組織では25アミノ酸残基を欠損した、不活性型の酵素をコードする短縮型mRNAが発現していた。亜鉛フィンガー、EF-ハンドなどの基本構造は保持されていた。DGKの亜鉛フィンガーの機能を調べるために、この部位の点変異導入型、欠損型のcDNAを調製し、COS,Sf9細胞で発現させて、変異型酵素の性質を調べた(坂根等、投稿準備中)。いずれの変異体も弱いながらDSK活性を保持していた。一方変異体のホスファチジルセリン結合能が著しく低下していることから、DSKの亜鉛フィンガーはDG結合部位ではナく、リン脂質結合部位であることが示唆された。DGKの機能を調べるために、ブタDGKalphaを安定発現するNIH3T3細胞クローンを得て解析中である。前報(FEBS Lett.,-92)に一致して、これらのクローンの細胞内DG量は半減したが、細胞増殖能が著しく亢進していた。DGK発現による細胞増殖の機序を検討中である。

The molecular biology of DG (DGK), molecular biology, and molecular biology has been studied. DGK reverse reaction: PA catalyst, enzyme concentrate, enzyme concentrate, JBC,-92, etc. In the first place, the disease was caused by DGK disease (alpha type), the disease was limited by the body, the maximum was detected at 7 years after birth, and the reproductive differentiation was induced in the first place (Goto, Mol.Brain Res.,-92). The DSKalpha child writes the preface of the machine to understand the purpose of the chromosome to change the chromosome (Fujikawa et al., BJ,-93). There is an accident that the child is in a special position, and that in the case of 5', there is a basic level of activity in the area. In order to understand the characteristics of this enzyme, it is necessary to understand the mechanism of this enzyme. In most cases, there is an indication of instigation (plus, etc., Cell.Signal.,-93), and the third item (DGKgamma, cDNA, etc.) exists in most cases (Jia Fei et al., contribution). Do not register your network features to show that you are suffering from poor health, poor health, and poor health in your organization. Inactive enzymes and short-form mRNA were detected in cells outside the network, in tissues, in tissues, and in inactive enzymes. Please do not know what to do, and EF- will keep it in order to keep it safe. In the DGK system, there is a significant increase in the number of samples, the location of the site, the type of cDNA, the type of COS,Sf9, the type of enzyme and the type of enzyme (Sakane, etc., in preparation for submission). The body is weak, the DSK activity is maintained, the body is weak. One side of the body can be used to show that the joint of DG and fat can be used to show that the joint of DG and fat can be affected by the combination of low temperature, low temperature, low temperature The DGK machine can be used to improve the safety of NIH3T3 cells. The results show that there are significant differences between the two. The former (FEBS Lett.,-92) was consistent with each other, and the intracellular DG level was significantly higher than that of the control group. DGK shows that the cell colonization mechanism is in the process of colonization.