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RNA腫瘍ウイルスによる細胞発癌時の脂質リン酸化酵素の役割

脂质磷酸化酶在RNA肿瘤病毒诱导细胞癌变过程中的作用

基本信息

批准号：
60015023
负责人：
加納英雄
金额：
$ 3.2万
依托单位：
Niigata University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1985
资助国家：
日本
起止时间：
1985 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究の課題は1)我々がブタ脳から精製したジアシルグリセロールキナーゼに対する単クロン抗体を調製し、2)腫瘍ウイルス感染細胞を用いてキナーゼ蛋白の免疫学的検討を行う事である。今年度は単クロン抗体の調製と、併行して抗キナーゼ家兎抗体を用いてブタ脳の酵素について免疫学的検討を行った。1)単クロン抗体調製とRNA-腫瘍ウイルス感染細胞での検討(魅発表)。マウスを精製キナーゼで免疫後常法により融合細胞を得、ELISAの方法でスクリーニングし現在5個のクロンを得て検討中である。抗体調製とその同定が手間取り、細胞レベルの検討に至っていない。調製済みの家兎抗体は、実験系としてのニワトリ胎児。ラット由来のfibroblaslsのキナーゼと交差性が弱く実験に用いられなかった。2)家兎抗体を用いたブタ脳キナーゼの免疫学的検討(J.Biol.Chem.in press)。初めて免疫学的、組織免疫学的検討を加え成果を得た。細胞上清と膜画分(シナプトソーム、ミクロソーム)に同じキナーゼ蛋白が存在する事、交叉性と組織染色により、組織・細胞によりキナーゼ蛋白の免疫学的多様性が存在する事、先に我々が精製したキナーゼはニューロン由来である事、sn-2型のモノアシルグリセロールのリン酸化も同一酵素が触媒する事等を証明した。3)ジアシルグリセロールキナーゼはリン酸化蛋白である(論文執筆中)脳より部分精製した酵素標品中にキナーゼをリン酸化する内因性のprotein kinaseが存在する事を発見した。ジアシルグリセロールキナーゼは自己リン酸化を触媒しない。このprotein kinaseはキナーゼのセリン残基をリン酸化し、サイクリックヌクレオチドや【Ca^(2+)】に依存しない。至適pHは5.5で、Km for ATPは10μMである。リン脂質合成酵素として初めて酵素蛋白のリン酸化現象を証明した。今後発癌細胞、神経細胞でのキナーゼのリン酸化の意義を検討する。

This study focuses on: 1) the preparation of anti-tumor antibodies for cell culture; 2) the development of immunologic studies of tumor cells infected with anti-tumor proteins. This year, the modulation of anti-inflammatory antibodies and the use of anti-inflammatory enzymes in immunology are discussed. 1) Detection of RNA-infected cells by antibody modulation and RNA-infected cells. The method of fusion cells and ELISA is now available in 5 different ways. Antibody modulation is regulated by hand, cell cycle and detection. The modulation of the immune system and the development of the immune system The origin of fibrobladders is weak. 2)A study of immunology of antibody use in the family (J. Biol. Chem. in press). Preliminary immunology, tissue immunology research and development results To demonstrate the existence of isoprotein in cell supernatant, the existence of cross-staining, the existence of immunological diversity of tissue and cell proteins, the origin of purification, and the existence of the same enzyme catalyst in sn-2-type supernatant. 3) The existence of endogenous protein kinase in partially purified enzyme standard was discovered. The solution is to remove the catalyst from the solution. The protein kinase is present in the presence of [Ca^(2+)]. pH = 5.5, Km = 10μM. The phenomenon of lipid synthase acidification was demonstrated. This paper discusses the significance of acidification in cancer cells and neurons in the future.