ホスフィン型新規螢光試薬の血漿中過酸化脂質の超高感度分析への応用

新型膦型荧光试剂在血浆中脂质过氧化物超灵敏分析中的应用

• 批准号: 05760101
• 负责人: 赤坂 和昭
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05760101/
• 关键词: 高速液体クロマトグラフィー; 脂質ヒドロペルオキシド; 螢光分析

申請者が開発した過酸化脂質の高感度分析システムを用い、ヒト血漿中のコレステロールエステル(CE)及びトリアシルグリセロール(TG)の各ヒドロペルオキシド(HPO)の同時分析法を確立した。ヒト血漿0.25mlに抗酸化剤であるBHTと内標準物質、及びメタノールとヘキサンを加え振盪、遠心分離により脂質を抽出し、減圧濃縮後分析装置に導入した。本法により、CE及びTGの各HPOを80-90%の回収率で再現性良く定量することが可能であった。新鮮血漿を分析した結果CE-HPOのみが検出されTG-HPOは検出されなかった。更にポリアニオンとマグネシウムを用いた血漿リポタンパクの沈殿分画法を応用し、HDLとLDL+VLDLの各リポタンパク画分中のHPOの分析法を確立し、それぞれの画分中のCE-HPOレベルを明かとした。また、同法を用いヒト血漿中にホスファチジルコリン(PC)-HPOを添加することによりCE-HPOが生成することを確認し、更にこれがレシチン-コレステロールアシル基転移酵素(LCAT)によることを証明した。一方、これまで困難であった中性脂質とリン脂質のHPOの同時分析を行うための新しい分析システムを開発した。予備分離カラムにより中性脂質とリン脂質(PC)を分離し、カラムスイッチングを用いオンラインで各画分をそれぞれ分離するための分析カラムに導いた。更にカラムからの溶出液の必要な部分をカラムスイッチングによりDPPPを用いた検出系に導くことにより目的のHPOを高感度で検出することができた。本法により、PC、TG及びCEの各HPOをpmolレベルで再現性良く同時定量することが可能で、ヒト血漿中の過酸化脂質分析への応用も可能であった。

Applicants are required to conduct high sensitivity analysis of acidified lipids, to determine the accuracy of CE, and to determine the accuracy of simultaneous analysis (HPO) in all samples of health care (TG). Blood 0.25ml, anti-acidification, anti-acidification, anti- In this method, the HPO of 80-90% of HPO, CE and TG may be used to quantify the possibility of sexual well-being. The results of the new blood analysis showed that the CE-HPO data showed that the TG-HPO data showed that the blood samples were broken. In order to make sure that the HPO analysis method is established in the painting score of HDL LDL+VLDL, and in the drawing score of the painting score, it is necessary to use the HPO analysis method to make sure that the painting score of the Shen Dian is determined by the method of HPO analysis in the painting score. In the same way, you can use the same method to make sure that the gene transfer enzyme (LCAT) has been detected in the blood by adding the CE-HPO to generate a confirmation of the gene. On the other hand, you should make sure that the neutral lipids and lipids are in good condition. At the same time, you will analyze the new fat analysis and start the HPO. It is necessary to separate the samples of neutral lipids, neutral lipids and lipids (PC) and analyze them in different ways. In the necessary part of the dissolution solution, it is necessary to use the DPPP to determine the sensitivity of the system. The HPO is sensitive. At the same time, quantitative assay was used to determine the possibility of reproducibility of HPO, PC, TG and CE, and to determine the possibility of overacidified lipid analysis in blood.

项目成果

Kazuaki Akasaka: "Simultancous determination of hydroperoxides of phosphatidylcholine,cholesterol esters and triac-ylglycerols by column-switching high-performance llquid chromatography with post column detection system" Journal of chromatography.

Kazuaki Akasaka：“通过柱切换高效液相色谱和柱后检测系统同时测定磷脂酰胆碱、胆固醇酯和三酰甘油的氢过氧化物”色谱杂志。