小胞体膜薬物代謝酵素分子の会合を観る-薬物代謝調節機構の分子形態学的解析

观察内质网膜药物代谢酶分子的关联——药物代谢调控机制的分子形态学分析

• 批准号: 05770022
• 负责人: 渡辺 淳
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Kansai Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05770022/
• 关键词: チトクロームP-450; チトクロームP-450還元酵素; 肝細胞; 小胞体膜; 分子密度; トポロジー; ラット

肝細胞小胞体膜に局在するチトクロームP-450(P-450)とその還元酵素の小胞体膜における存在様式を、これらの分子を組み込んだ人口脂質膜および実際の肝細胞小胞体膜を用いて明らかにすることを試みた。1.小胞体膜をシミュレートするための、薬物代謝酵素を組み込んだ人口脂質膜を作製するためにラット肝細胞の小胞体膜1平方ミクロンあたりに組み込まれている薬物代謝酵素分子数を測定した。(1)二波長顕微吸光測光法と電顕形態計測法を組合せて計測したラット肝細胞小胞体膜におけるP-450分子密度は約3,500(肝小葉周辺部)〜6,000分子(中心部)/平方ミクロンであった。(2)画像解析装置を用いた定量免疫組織化学法を開発し、この方法と、以前開発したニトロセルロースモデルと顕微測光法とを組合せたP-450還元酵素含量の測定法を併用して測定したラット肝細胞小胞体膜におけるP-450還元酵素分子密度は約100(肝小葉周辺部)〜180分子(中心部)/平方ミクロンであった。2.上記の実験結果をもとに、フェノバルビタールを投与したラットの肝から分離・精製したP-450IIB-1およびP-450還元酵素を人工脂質膜に組み込んで脂質膜標品(unilamellar proteoliposome)を得、分子を分光学的に解析したところ、組み込み密度を生体肝細胞よりやや高く設定した場合に良好な結果が得られた。3.こうして作製した人工脂質膜を急速凍結・割断してレプリカを得、電顕観察した結果、膜露出領域の大きな薬物代謝酵素の会合体が形成されていることが判明した。この結果はいままで提唱されている多量体モデル説を支持するものである。しかしながら、in vivoの小胞体膜では、この会合体に相当する構造を観察することはできなかった。現在、この会合体の三次構造をエピトープ特異的抗体を作製して解析中である。

Small hepatocellular cell body membrane に bureau in す る チ ト ク ロ ー ム P - 450 (P - 450) と そ の is の small cell body yuan enzyme membrane に お け る others type を, こ れ ら の molecular を group み 込 ん だ population lipid membrane お よ び be interstate の を small hepatocellular cell body membrane with い て Ming ら か に す る こ と を try み た. 1. The small cell body membrane を シ ミ ュ レ ー ト す る た め の を group, 薬 metabolic enzyme み 込 ん だ population lipid membrane を cropping す る た め に ラ ッ ト hepatocellular の small cell body membrane 1 square ミ ク ロ ン あ た り に group み 込 ま れ て い る 薬 content determination of metabolic enzyme molecule number を し た. (1) two wavelength 顕 micro absorption photometry と 顕 shape measuring method を combination せ て measuring し た ラ ッ ト small hepatocellular cell body membrane に お け る は P - 450 molecular density of about 3500 (lobular weeks 辺) ~ 6000 molecules (center)/square ミ ク ロ ン で あ っ た. (2) analytical device を portrait with い た quantitative immune histochemical methods を open 発 し, こ の way と, before 発 し た ニ ト ロ セ ル ロ ー ス モ デ ル と 顕 micro photometry と を combination せ た P - 450 yuan also を の enzyme determination method and し て determination し た ラ ッ ト small hepatocellular cell body membrane に お け る P - 450 also yuan は enzyme molecule density about 100 (liver Perilobular 辺 part) - 180 molecules (central part)/ square 辺 ロ ロ であった. 2. Written の be 験 results を も と に, フ ェ ノ バ ル ビ タ ー ル を cast with し た ラ ッ ト の liver か ら separated, refined し た P - 450-1 iib お よ び P - 450 yuan also enzyme を に bilayer lipid membrane group み 込 ん で lipid membrane standard product (unilamellar Proteoliposome) を, molecular を points of optical analytical し に た と こ ろ, group み 込 み density を raw body liver cell よ り や や set high く し た occasions に な good results ら が れ た. 3. こ う し て cropping し た を bilayer lipid membrane, quick freezing cut し て レ プ リ カ を, electric 顕 観 examine し た results, large film exposed areas の き な 薬 formation metabolic enzyme の would fit が さ れ て い る こ と が.at し た. The <s:1> result of ままで ままで ままで sings されて る る a large volume モデ モデ says を in support of する <s:1> である である である. し か し な が ら, the in vivo の small cell body membrane で は, こ の will fit に quite す る tectonic を 観 examine す る こ と は で き な か っ た. Now, the <s:1> <s:1> will combine three times to construct をエピト プ プ specific antibodies を to produce <s:1> て in the analysis である.

项目成果

渡辺淳: "形態計測と顕微分光測光による細胞内分子密度の測定" 細胞. 26印刷中. (1994)

Jun Watanabe：“通过形态测定法和显微分光光度法测量细胞内分子密度”，《细胞》26，已出版（1994 年）。

Watanabe,Jun: "Postnatal development and sublobular distribution of cytochrome P-450 in rat liver:Amicrophotometric study." J.Histochem.Cytochem.41. 397-400 (1993)

Watanabe, Jun：“大鼠肝脏中细胞色素 P-450 的产后发育和小叶下分布：显微光度研究。”

Kanai,Kazuo: "Quantitative analysis of smoothendoplasmic reticulum proliferation in peripurtal,midzonal,and perirenular hepatocytes of mice after〜." Exp.Toxic.Pathol. 45. 199-203 (1993)

Kanai，Kazuo：“小鼠周围、中区和肾周围肝细胞的平滑内质网增殖的定量分析。Exp.Toxic” 45。199-203（1993）

Watanabe,Jun: "Densities of NADPH-ferrihemoprorein reductase and cytochrome P-450 molecules in the endoplasmic reticulum membrane of rat heputocytes" J.Histochem.Cytochem.41. 43-49 (1993)

Watanabe，Jun：“大鼠肝细胞内质网膜中 NADPH-高铁血蛋白还原酶和细胞色素 P-450 分子的密度”J.Histochem.Cytochem.41。

Watanabe,Jun: "Measurement of antigen content in tissve sections by quantitative lightmicroscopic enzyme immunohistochemistry" Acta Histochem.Cytochem. 26. 277-279 (1993)

Watanabe，Jun：“通过定量光显微酶免疫组织化学测量组织切片中的抗原含量”Acta Histochem.Cytochem。