遺伝子、及び固体レベルでのCキナーゼ分子種の組織特異性の解析

个体水平上 C 激酶分子种类的基因和组织特异性分析

基本信息

批准号：
05770087
负责人：
長田真一
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Yokohama City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05770087/
关键词：
プロテインキナーゼC 組織特異性精巣プロモーター領域

项目摘要

1.本研究において我々は、様々な分化段階の細胞から成る精巣をモデルにして、細胞の増殖、分化といった段階に異なったPKC分子種が関与するのではないか、という仮説の検証を試みた。まず、ノーザンブロット解析の結果、PKC分子種の中でnPKCdeltaとnPKChthetaの発現が精巣において非常に高いことが分かった。また、両分子種の精巣におけるmRNAの大きさは、他の臓器のそれに比べて小さく、精巣特異的スプライシング機構の存在が示唆された。PCR法を用いて精巣由来のnPKCdelta,thetaのcDNAをクローニングして調べたところ、両分子種共に蛋白コード領域は短くなっておらず、mRNAのサイズが小さくなっているのは、蛋白非コード領域のスプライシングによるものと考えられた。nPKCdeltaは、in situハイブリダイゼーションの結果、減数分裂後の前期精子細胞に特異的に発現が認められた。エルトリエーターで精巣の構成細胞を分画した後のノーザンブロットでも同様の結果が得られた。従って、nPKCdeltaは精巣において半数体特異的に発現していることが示唆された。一方nPKCthetaは、theta特異的抗体を用いて免疫組織染色を行ったところ、アンドロゲンを分泌する間質細胞、ライディッヒ細胞特異的に強い染色が見られた。精巣におけるステロイドホルモンの合成にPKCが関与しているという報告があり、今後ライディッヒ細胞の培養細胞を用いて、nPKCthetaとステロイドホルモンの合成の関係について調べていく予定である。2.PKC分子種の組織特異的発現機構を解析するために、これまで我々が上皮組織での発現が高いことを示してきたnPKCetaの5'上流のゲノムDNAのクローニングを試みた。その結果、5'上流のプロモーター部分を含む領域のクローニングに成功し現在解析中である。

1。在这项研究中，我们以睾丸为模型，该睾丸由各个分化阶段的细胞组成，并试图检验以下假设：不同的PKC分子物种可能与细胞增殖和分化等阶段有关。首先，北印迹分析表明，睾丸中PKC分子物种中的Npkcdelta和Npkchtheta表达非常高。此外，这两种物种的睾丸中的mRNA大小都比其他器官小，表明存在特定的剪接机制。当从Npkcdelta和theta衍生的睾丸的cDNA被克隆并通过PCR检查时，人们认为蛋白质编码区域对于两个分子种类均不短，并且由于蛋白质非编码区域的拼接而降低了mRNA大小。由于原位杂交后，在减数分裂后，NPKCDELTA在预言精子细胞中特异性表达。用牙膜分离睾丸成分细胞分离后，通过北印迹获得了相似的结果。因此，有人提出npkcdelta在睾丸中特异性表达单倍体。另一方面，当NPKCTHETA使用硫代特异性抗体进行免疫组织化学染色时，专门针对分泌雄激素的基质细胞和Leidig细胞的特异性染色。据报道，PKC参与了睾丸中类固醇激素的合成，我们计划研究NPKCTHETA与类固醇激素合成的关系，并使用Leidig细胞中的培养细胞进行了合成。 2。为了分析PKC分子物种的组织特异性表达机制，我们试图克隆NPKCETA上游的基因组DNA 5'，以前已显示出在上皮组织中高度表达。结果，包含5'上游启动子部分的区域的克隆成功，目前正在进行分析。