遺伝子、及び固体レベルでのCキナーゼ分子種の組織特異性の解析

个体水平上 C 激酶分子种类的基因和组织特异性分析

• 批准号: 05770087
• 负责人: 長田 真一
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Yokohama City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05770087/
• 关键词: プロテインキナーゼC; 組織特異性; 精巣; プロモーター領域

1.本研究において我々は、様々な分化段階の細胞から成る精巣をモデルにして、細胞の増殖、分化といった段階に異なったPKC分子種が関与するのではないか、という仮説の検証を試みた。まず、ノーザンブロット解析の結果、PKC分子種の中でnPKCdeltaとnPKChthetaの発現が精巣において非常に高いことが分かった。また、両分子種の精巣におけるmRNAの大きさは、他の臓器のそれに比べて小さく、精巣特異的スプライシング機構の存在が示唆された。PCR法を用いて精巣由来のnPKCdelta,thetaのcDNAをクローニングして調べたところ、両分子種共に蛋白コード領域は短くなっておらず、mRNAのサイズが小さくなっているのは、蛋白非コード領域のスプライシングによるものと考えられた。nPKCdeltaは、in situハイブリダイゼーションの結果、減数分裂後の前期精子細胞に特異的に発現が認められた。エルトリエーターで精巣の構成細胞を分画した後のノーザンブロットでも同様の結果が得られた。従って、nPKCdeltaは精巣において半数体特異的に発現していることが示唆された。一方nPKCthetaは、theta特異的抗体を用いて免疫組織染色を行ったところ、アンドロゲンを分泌する間質細胞、ライディッヒ細胞特異的に強い染色が見られた。精巣におけるステロイドホルモンの合成にPKCが関与しているという報告があり、今後ライディッヒ細胞の培養細胞を用いて、nPKCthetaとステロイドホルモンの合成の関係について調べていく予定である。2.PKC分子種の組織特異的発現機構を解析するために、これまで我々が上皮組織での発現が高いことを示してきたnPKCetaの5'上流のゲノムDNAのクローニングを試みた。その結果、5'上流のプロモーター部分を含む領域のクローニングに成功し現在解析中である。

1. In this study, we tried to identify the relationship between PKC molecular species and cell differentiation and differentiation. The results of PKC molecular species analysis show that PKC delta and PKC theta are very high in the production of PKC molecules. The expression of mRNA in the protein of a molecular species is indicative of the presence of a protein specific to the protein. PCR method is used to refine the origin of nPKC delta,theta cDNA, protein domain, mRNA domain, protein non-protein domain, protein domain and protein domain. The results of nPKCdelta in situ ーン, a specific occurrence in prophase sperm cells after meiosis, are well recognized. The results of the study were as follows: In addition, PKCdelta is a semi-specific development tool. One of the nPKC theta and theta specific antibodies was stained by immunostaining, and the other was secreted by stromal cells and cell specific strong staining. The relationship between PKC and the synthesis of PKC in the synthesis of PKC. 2. To analyze the tissue-specific discovery mechanism of the PKC molecular species, we demonstrated that the discovery of PKC in epithelial tissues is high. We also attempted to analyze the 5'upstream essential DNA of nPKCeta. The results of the 5'upper stream are included in the analysis of the field.

项目成果

Osada,S.,Hashimoto,y.,Nomura,S.,Konno,Y.,Chida,K.,Tajima,O.,Kubo,K.,Akimoto,K.,Koizumi,H.,Kitamura,Y.,Suzuki,K.,Ohno,S.and Kuroki,T.: "Predominant expression of novel protein kinase C eta,aCa^<2+>-independent isoform of protein kinase C in epithelial tiss

大田S.、桥本y.、野村S.、绀野Y.、千田K.、田岛O.、久保K.、秋元K.、小泉H.、北村Y.、

Koizumi, H., Kohno, Y., Osada, S., Ohno, S., Ohkawara, A.and Kuroki, T.: "Differentiation-associated localization of nPKCeta, aCa^<++>-independent protein kinase C,in normal human skin and skin diseases." J.Investigative Dermatology. 6. 858-863 (1993)

Koizumi, H.、Kohno, Y.、Osada, S.、Ohno, S.、Ohkawara, A. 和 Kuroki, T.：“nPKCeta、aCa^< > 独立蛋白激酶 C 的分化相关定位，在正常情况下