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腸炎ビブリオの産生する耐熱性溶血毒の耐熱性構造の解析

副溶血弧菌耐热溶血毒素的耐热结构分析

基本信息

批准号：
05770188
负责人：
飯田哲也
金额：
$ 0.7万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05770188/
关键词：
腸炎ビブリオ耐熱性溶血毒キメラ蛋白

项目摘要

既にクローン化され塩基配列の決定も完了していたVp‐TDHおよびVh‐rTDHの各構造遺伝子を用いて下記の研究を行った。1.site‐directed mutagenesisによるVp‐TDH,Vh‐rTDH構造遺伝子への共通制限酵素切断部位の付加.site‐directed mutagenesisによりVp‐TDH構造遺伝子にHincIIの部位を,Vh‐rTDH遺伝子にSau3AIの部位を新たに導入した.HincIIはVh‐rTDH遺伝子の相当する部位に,Sau3AIはVp‐TDH遺伝子の相当する部位にそれぞれ存在しているものである.これら2つの制限酵素切断部位に加え,Vp‐TDHおよびVh‐rTDHの両者に共通に存在していたHapIIおよびNdeIの計4つの部位を用いてVp‐TDH,Vh‐rTDH構造遺伝子間でのfusion遺伝子の作製を行った.2.Vp‐TDH,Vh‐rTDH構造遺伝子間での一連のfusion遺伝子を作製および大腸菌内での発現.上記制限酵素切断部位を用い,これまでに計18種類のfusion遺伝子の作製した.これらの遺伝子を発現ベクターに導入し大腸菌内で発現させ,すべてのクローンから溶血活性のある遺伝子産物の産生が確認された.これら産物の耐熱性を検討することでVp‐TDHの耐熱性に重要であると考えられる構造を解析した結果,Vp‐TDHはN未端より69位から138位の領域のアミノ酸配列がVh‐rTDHのものに置換されると耐熱性を失うことが明らかになった.Vp‐TDHとVh‐rTDH間には本領域中に13個のアミノ酸置換が見られる.これら置換の見られるアミノ酸残基がVp‐TDHの耐熱性に重要であると考えられるので,今後この点について追求していく予定である.

Now that you have made a decision on the basis of the basic configuration, you have completed the decision on the Vp-TDH, Vh-rTDH, and so on. The common restriction enzyme cutting site was made by 1.site-directed mutagenesis, Vp-TDH,Vh-rTDH, Vp-TDH, Vh-rTDH, HincII, Vh-rTDH, Sau3AI, Vp-TDH, Vp-TDH, Vh-rTDH, HincII, HincII, and Sau3AI. The restriction enzyme cut-off parts are added in the two-stage system, and there is a common part of the Vp-TDH-based Vh-rTDH device. The four-month-old Vp-TDH,Vh-rTDH is used to make the inter-cell fusion filter. 2. Vptel TDH MVHMRT rTDH makes a connection between the crackers, and a link between the fusion chains can be detected in the bacteria. It is noted that the enzyme cut-off site is used, and it is estimated that 18 kinds of fusion spores are used. There was no sign of infection in the bacteria. The hemolytic activity was detected. The product was confirmed. The results of the Vp-TDH analysis show that the Vp-TDH has 69 positions in the field and 138 places in the field. The Vh-rTDH has been assigned to the customer for the loss of endurance, and the Vh-rTDH has been assigned to 13 of the 13 customers in the field. In the future, we will try to find out the importance of acid residue Vp-TDH tolerance. In the future, we will be in pursuit of predetermined conditions.