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腸炎ビブリオ耐熱性溶血毒(TDH)変異毒素を用いたTDHレセプターの解析

使用副溶血弧菌耐热溶血素 (TDH) 突变毒素分析 TDH 受体

基本信息

批准号：
06770200
负责人：
飯田哲也
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770200/
关键词：
腸炎ビブリオ耐熱性溶血毒変異毒素

项目摘要

本研究では,われわれがこれまでにin vitro mutagenesisの手法で得てきた腸炎ビブリオ耐熱性溶血毒(TDH)の変異毒素をツールとして用いることにより、毒素蛋白の活性発現機序を解析することを目的として研究を行なった.これまでに得られていたTDH変異毒素のうち,R7と名づけた変異毒素は血液寒天上で野生型TDHの溶血活性を阻害する活性を示した.そこでこのR7についてより詳細な性状の解析を加えた.精製R7の溶血活性は野生型TDHの1000分の1以下に低下していたが,試験管内で野生型TDHの16倍以上の濃度を共存させた場合R7は野生型TDHの溶血を完全に阻害した.フローサイトメトリーおよびEnzyme immunoassayによりR7のヒト赤血球結合能を解析したところ,R7は野生型TDHにくらべ約50%の赤血球結合能を保持していることが明らかになった.また,野生型TDHにみられる赤血球膜に対するCa^<2+>イオンやpropidium iodide透過性亢進作用はR7では全く観察されなかった.これらの結果は,R7はその溶血活性はほぼ完全に喪失しているものの,ヒト赤血球への結合能は保持する変異毒素であることを示す.このような変異毒素の存在は,いまだ詳細なプロセスが明らかでないTDHによる溶血の機構が赤血球膜への結合とそれ以降の過程の,少なくとも2つのステップよりなることを示唆する.また,R7のように細胞(赤血球)への障害作用はもたないが結合能は保持する変異毒素は,いまだ実体の不明であるTDHレセプターの同定のためのプローブとして有用であると考えられ,現在この方向で研究を継続中である.

The aim of this study is to elucidate the mechanism of activation of toxin proteins in vitro mutagenesis. The hemolytic activity of wild-type TDH was inhibited by the presence of R7, which was identified as the isotoxin.そこでこのR7についてより详细な性状の解析を加えた. The hemolytic activity of purified R7 was lower than that of wild-type TDH by less than 1000 minutes, and the hemolytic activity of purified R7 was completely inhibited by R7 when the concentration of wild-type TDH in the test tube was more than 16 times that of wild-type TDH. The binding energy of R7 cells was analyzed by Enzyme immunoassay, and the binding energy of R7 cells was maintained at about 50% of wild type TDH. The wild type TDH has been observed to be sensitive to Ca^<2+> and proton iodide permeability. As a result, the hemolytic activity of R7 was completely lost and the binding energy of erythrocytes was maintained. The presence of isotoxins in the blood cell membrane and the mechanism of hemolysis in the blood cell membrane are discussed in detail. The protective effect of R7 on the cells (erythrocytes) was studied.