腸炎ビブリオの産生する耐熱性溶血毒に対する標的細胞上のレセプターの解析

副溶血弧菌耐热溶血毒素靶细胞受体分析

• 批准号: 09770178
• 负责人: 飯田 哲也
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770178/
• 关键词: 腸炎ビブリオ; 耐熱性溶血毒; レセプター; expression cloning

腸炎ビブリオの産生する耐熱性溶血毒(TDH)に対する標的細胞上のレセプターの同定を目的とし、TDHに対して耐性を示す変異細胞株MR-T1細胞に野生型細胞株であるRat-1細胞から調製したcDNAライブラリを導入することにより、TDHレセプターの機能が回復したクローンの選択を試みている。これまでにRat-1細胞からのcDNAライブラリの作成が完了し、これをMR-T1へ導入することによりをTDHレセプターのexpressioncloningの実験系が確立できた。現在cloningを遂行中である。またこれと同時にTDHに対する細胞膜上のレセプターの性状を解析するためにいくつかの実験を行っており以下のような成績を得ている。標的細胞のエンドグリコセラミダーゼ処理を行い処理細胞に対するTDHの細胞毒性を調べたが活性は低下しなかった。また糖脂質欠損変異細胞であるGM-95はTDHに対して高感受性を示した。これらのことからTDHのレセプターは糖脂質ではないということが示唆された。さらにTDHによる溶血の各種ガングリオシド(GM1、GM2、GD1a.GD1b.GT1b)およびアシアロGM1による阻害活性を調べた。その結果、これまでTDHのレセプターであると報告されていたGT1bガングリオシドによる特異的な阻害は観察されなかった。また、ヒト赤血球を150μg/mlまでの抗GT1b単クローン抗体で処理し、その後TDHによる溶血活性を測定したが、この単クローン抗体による溶血の阻害はみられなかった。以上の結果はGT1bガングリオシドがTDHのレセプターであるというこれまでの考えと反するものであり、何がTDHのレセプターとなっているかについてさらなる検討が必要であることを意味する。以上のような知見を参考にし今後TDHレセプターの同定を遂行していく。

The expression of the protein in target cells was determined by the induction of a heat-resistant hemolytic toxin (TDH) into Rat-1 cells. The expression of the protein in target cells was determined by the induction of a heat-resistant hemolytic toxin (TDH) into Rat-1 cells. The cDNA cloning process for Rat-1 cells was completed, and the expression cloning process for MR-T1 cells was established. Now cloning. The analysis of the characteristics of the TDH on the cell membrane is carried out in the following ways: The target cells were treated with TDH and its cytotoxicity was decreased. GM-95 has high sensitivity to glucose and lipid depletion. The sugar content of the lipid is not high enough. In addition, TDH can modulate the inhibition activity of various kinds of hemolytic enzymes (GM1, GM2, GD1a, GD1b, GT1b) and GM1. The result is that the TDH has a special resistance to attack. The hemolytic activity of the anti-GT 1b antibody was measured at 150μg/ml of erythrocytes and after treatment with TDH. The above results show that the GT1b has a wide range of options for TDH. The above information is for reference and will be implemented in the future.

项目成果

T.Iida et al.: "Close proximity of the tah,trh and wre genes on the diromosome of Vibrio Porehaomilytion" Microbiology. 144. 2517-2523 (1998)

T.Iida 等人：“Vibrio Porehaomilytion 的二粒体上的 tah、trh 和 wre 基因非常接近”微生物学。

T.Iida and T.Honda: "Hemolysins produced by uibrios." J.Toxicol.Toxin Rev.16. 215-227 (1997)

T.Iida 和 T.Honda：“uibrios 产生的溶血素。”

W.K.Sang et al.: "Multidrug-resistant entevogy gregdtive Escherichia coli associated with persistent diowhia in Kenyan children." Emerg.Infect.Dis.3. 373-374 (1997)

W.K.Sang 等人：“多重耐药性大肠杆菌与肯尼亚儿童持续性死亡有关。”

A.Naka,T.Iida,et al.: "Nicking sites in A subunits of cholera toxin and Escherichacol half-labile enterotoxin for Vibrio chederal hemogoshitinin/protease." Toxicon. 36. 1001-1005 (1998)

A.Naka,T.Iida,et al.：“霍乱毒素和大肠杆菌半不稳定肠毒素的 A 亚基中针对切德拉弧菌血凝素/蛋白酶的切口位点。”

A.Naka, T.Iida et al.: "Nicking sites in A subunits of chdera toxin and Escherchiacol:heat-labile enterotoxin for Vibro diok henngglutinin/protecyl." Toxicon. in press (1998)

A.Naka、T.Iida 等人：“chdera 毒素和大肠杆菌的 A 亚基中的切口位点：Vibro diok henngglutinin/protecyl 的不耐热肠毒素。”