ケラチノサイトに発現しているチロシン・キナーゼ蛋白遺伝子のクローニング

角质形成细胞中表达的酪氨酸激酶蛋白基因的克隆

• 批准号: 05770657
• 负责人: 広近 玲
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: The Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05770657/
• 关键词: チロシンキナーゼ; ケラチノサイト; RT-PCR

出生直後のB57BL/6マウスの皮膚(epidermis+dermis)よりグアニジウムイソチオシアネイド法によりmRNAを抽出した。oligodTセファロースでpolyA+mRNAにした後、チロシン・キナーゼ遺伝子カイネースドメインの5'側で良く保存されているDNA塩基配列をもとに作製したプライマー(5'プライマー)とpolydTの間でRT-PCRを行った。次に5'プライマーとカイネースドメインの3'側で良く保存されているDNA塩基配列をもとに作製した3'プライマーの間でもう一度PCRを行った。このようにして2段階のPCRを行い、約210bpのDNA断片を増幅することに成功した。このDNA断片をlambdaZAPファージアームに組み込み、4.5x10^5、1.7x10^5プラーク/mugのサイズの2つのファージライブラリーを作製した。これらのライブラリーより得た約200クローンについてDNA塩基配列を決定し、ホモロジーサーチにより既報のチロシン・キナーゼ遺伝子でないものを検索した。その結果、レセプタータイプとsrcタイプチロシンキナーゼのそれぞれにつき1つ、新しい遺伝子を見つけることができた。しかし、どちら遺伝子も皮膚や他の組織における発現は極めて弱く、現在cDNAの全長のクローニングと、各遺伝子の発現に関して組織特異性を検討しているところである。

B57BL/6 is a new type of gene expression system. OligodT gene expression of polyA+mRNA was detected by RT-PCR in the 5'-side of the gene expression vector, and the gene expression vector was well preserved in the 5'-side. 3'side of the DNA sequence is preserved. The 2-segment PCR was successfully performed, and the DNA fragment of about 210bp was successfully amplified. This DNA fragment is lamdaZAP, 4.5x10^5, 1.7x10^5, and 2.0x10^5. The results of this study were about 200 samples, and the DNA base alignment was determined. The results of the survey are as follows: The expression of the cDNA is related to the development of tissue-specific genes.

项目成果

H.Hirochika and R.Hirochika.: "Ty1-copia group retrotransposons are ubiquitous in higher plants." Jpn.J.Genet.68. 35-46 (1993)

H.Hirochika 和 R.Hirochika.：“Ty1-copia 组反转录转座子在高等植物中普遍存在。”