椎間板基質合成の調節因子とストレス受容の細胞生物学的解析

椎间盘基质合成和应激接收调节因子的细胞生物学分析

• 批准号: 05771060
• 负责人: 大島 博
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Toyama Medical and Pharmaceutical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05771060/
• 关键词: 椎間板; 基質代謝; insuline like growth factor-1(IGF-1); IGF-1 receptor; in situ hybridization

IGF-1は至適荷重下において椎間板のプロテオグリカン合成促進作用を有するが、本年度の研究成果により椎間板の細胞表面には軟骨細胞より多数のIGF-1受容体を有するとともに、椎間板細胞自らIGF-1を合成、分泌していることが明らかにされ、IGF-1を介した基質代謝調節機構を備えていることが示唆された。1)椎間板細胞におけるIGF-1の自己分泌機構の証明椎間板培養細胞に対してIGF-1のmRNAに対するoligonucleotide probeを用いたIn situ hybridizationを行った。その結果、椎間板細胞核周囲の細胞質および細胞周囲には明らかにIGF-1のmRNAが発現されており、椎間板細胞はIGF-1の合成および自己分泌機構を有していることが確認された。現在、成牛および胎児牛椎間板を用いてIGF-1の自己分泌能と成熟度の関係を検討中である(平成6年度日本整形外科学会基礎学術集会にて発表予定)。2)椎間板細胞におけるIGF-1受容体の検証(A)免疫組織学的染色:新鮮椎間板組織切片および椎間板培養細胞に対してIGF-1受容体のalpfa-subunitに対する家兎polygonal IgG抗体を用いたABC法によりIGF-1受容体を免疫組織学的に初めて証明した。このIGF-1受容体は線維輪に比べて髄核細胞においてより多く染色されること、培養細胞でも細胞の形態が若干異なるもののIGF-1受容体を失っていないことが確認された。(B)Scatchard解析によるIGF-1受容体の特性の解析:胎児牛椎間板と成牛椎間板髄核の培養細胞に対してradiommunoassay(Scatchard解析)を行った結果、椎間板培養細胞には関節軟骨の培養細胞とほぼ類似した親和性をもつ、より多数の受容体(9.25×10^4/成牛椎間板細胞、0.2-1.3×10^4/関節軟骨細胞)を有すること、年齢や成熟度による数と親和性の差異は少ないことが判明した(平成5年度軟骨代謝研究会で発表)。

IGF-1 has been shown to promote the synthesis of IGF-1 on the surface of intervertebral plate cells under appropriate load. Most IGF-1 receptors exist on the surface of intervertebral plate cells. IGF-1 is secreted from the surface of intervertebral plate cells. 1)The IGF-1 mRNA expression In cultured intervertebral plate cells was detected by oligonucleotide probe in situ hybridization The results showed that IGF-1 mRNA was expressed in the cytoplasm and cytoplasm of intervertebral plate cells, and IGF-1 synthesis and secretion in intervertebral plate cells were confirmed. At present, the relationship between IGF-1 secretion and maturity is being discussed in adult and fetal bovine intervertebral plates (Table proposed at the Basic Academic Conference of the Japanese Society of Plastic Surgery in 2006). 2)Immunohistological staining: Fresh intervertebral plate tissue sections and cultured intervertebral plate cells were used to detect IGF-1 receptor alpfa-subunit antibodies. ABC method was used to detect IGF-1 receptor. The IGF-1 receptor was identified by multiple staining of nuclear cells and cultured cells. (B) Analysis of IGF-1 receptor characteristics by Scatchard analysis: The results of radioassay (Scatchard analysis) of cultured cells from fetal bovine intervertebral plate and adult bovine intervertebral plate nucleus showed that the affinity of cultured cells from fetal bovine intervertebral plate to cultured cells from articular cartilage was similar, and the affinity difference between most receptors (9.25×10^4/adult bovine intervertebral plate cells, 0.2-1.3×10^4/articular cartilage cells) was small.

项目成果

長田 龍介,他: "牛椎間板におけるインスリン様成長因子-1(IGF-1)受容体の検討" 日本軟骨代謝研究会抄録集. 7. 24-25 (1994)

Ryusuke Nagata 等：“牛椎间盘中胰岛素样生长因子-1 (IGF-1) 受体的研究”日本软骨代谢研究会摘要 7. 24-25 (1994)。