卵および受精卵におけるc-mos,c-kit遺伝子の発現調節機構の解明

阐明c-mos和c-kit基因在卵子和受精卵中的表达调控机制

• 批准号: 05771242
• 负责人: 近藤 育代
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05771242/
• 关键词: マウス卵; RT-PCR; c-mos; PMSG; エストロゲン; プロゲスロン

1.3-6週令の雌マウスに妊馬血清ゴナドトロピン(PMSG)を腹腔内に投与し、投与後、経時的(12,24,36,48時間)に開腹し、卵胞より卵を採取した。顆粒膜細胞を除去後、各群5個に卵より総RNAをグアニジン-塩酸法により抽出した。48時間後にヒト絨毛性ゴナドトロピン(hCG)を投与し、排卵後卵管内より得られた卵に対しても、同様に処理した。2.抽出されたRNAを逆転写酵素(RT)を用い二本鎖DNAに転換した。既に報告されているマウスc-mos遺伝子の塩基配列に対するプライマーを用い、DNA増幅装置によるRT-PCRを行い、c-mos DNAの一部を増幅した。同時にbeta-アクチンmRNAも同様に増幅し、対照とした。アガロース電気泳動法により増幅されたDNAを分離し、デンシトメーターを用い各々のバンドの濃度を測定した。beta-アクチン量を基準にc-mos遺伝子の発現量を定量化した。3.その結果、PMSG投与によりマウス卵におけるc-mos mRNAは経時的に増加し、PMSG投与後、36時間で頂値を示した。排卵後の卵では急速にc-mos遺伝子の発現が低下した。すなわち、PMSGがマウスではin vivoにおいて遺伝子の発現を刺激し、排卵後は減少することが示唆された。4.上記のRT-PCR法による定量化の信頼性を検討するため、PMSG投与後経時的に収集した各群約500個の卵より総RNAを抽出し、アガロース電気泳動を行った。これをニトロセルロース膜にノーザン・ブロット法により転写し、アイソトープにて標識したc-mosおよびbeta-アクチンcDNAを用いてハイブリダイゼーションした。その結果、上記のRT-PCR法と同様の、PMSGによるc-mos mRNA量の変化が観察された。以上の結果より、RT-PCR法による定量化はノーザン・トランスファーによる定量化と同等の定量性が得られることが明かとなった。

1.3-6 Pregnant horse serum (PMSG) was injected intraperitoneally, after injection, and at 12, 24, 36, and 48 hours of laparotomy, and eggs were collected. After removal of the granular membrane cells, 5 eggs from each group were extracted by the acid method. After 48 hours, the villous oocyte (hCG) was injected into the oocyte, and the oocyte was collected in the oocyte. 2. RNA reverse transcription enzyme (RT) is used to extract DNA from the genome. This report describes the use of RT-PCR in DNA amplification devices and the amplification of part of c-mos DNA. At the same time, beta-6 mRNA increased in amplitude and illumination. The concentration of DNA was determined by electrokinetic method. Beta-3 is a benchmark for quantification of c-mos gene expression. 3. The results of PMSG administration showed that c-mos mRNA increased at the time of administration and peaked at the time of administration. After ovulation, eggs are rapidly released, and c-mos genes are rapidly released. The PMSG may stimulate the development of sperm in vivo, but may decrease after ovulation. 4. The quantitative analysis of the RT-PCR method described above collected about 500 eggs from each cluster at the time of PMSG injection. This is the first time that we've had a chance to talk to each other. The results were similar to those reported above by RT-PCR and PMSG, and the changes in c-mos mRNA levels were observed. The quantitative results obtained by RT-PCR are as follows:

项目成果

花井一夫: "卵細胞におけるc-mos遺伝子発現の検討(抄)" 日本内分泌学会雑誌. 69. 331- (1993)

Kazuo Hanai：“卵细胞中 c-mos 基因表达的检查（摘录）”日本内分泌学会杂志 69. 331-（1993）。